多巴胺相關(guān)神經(jīng)特異性轉(zhuǎn)錄因子DAT1功能的初步研究.pdf

1、多巴胺(Dopamine,DA)可以激活膠質(zhì)細(xì)胞,活化后的膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)多巴胺支配的神經(jīng)元有保護(hù)作用.為了解DA作用于膠質(zhì)細(xì)胞的分子機(jī)制,獲得DA系統(tǒng)相關(guān)基因,該室利用消減抑制雜交和同源克隆技術(shù),克隆并鑒定了星形膠質(zhì)細(xì)胞在多巴胺作用下發(fā)生反應(yīng)性變化時(shí)差異表達(dá)的基因,獲得了兩條DA調(diào)節(jié)表達(dá)的新基因,多巴胺相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(Dopamine-associate trscription factor,DAT1,GenBank＃AF258348)是在此

2、研究中獲得的DA調(diào)節(jié)膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)表達(dá)的基因之一.生物信息學(xué)分析表明,該基因是僅有兩個(gè)LIM結(jié)構(gòu)域的LIM家族轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,該蛋白分子中除LIM結(jié)構(gòu)域外無(wú)其他同源序列,屬于LIM蛋白超家族中的LIM-only(LMO)亞家族.LIM結(jié)構(gòu)域由兩個(gè)串聯(lián)的富含半胱氨酸的鋅指基元組成,在進(jìn)化中十分保守.目前已證實(shí)LIM蛋白可通過(guò)其LIM結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)蛋白與蛋白之間的相互作用,從而在機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育、分化及細(xì)胞骨架的組織中發(fā)揮非常重要的作用.LIM蛋白可

3、分為四類(lèi),其中LIM-HD蛋白可與DNA結(jié)合,具有轉(zhuǎn)錄因子的活性,可調(diào)節(jié)多種信號(hào)途徑,它們?cè)诩?xì)胞命運(yùn)決定和器官的發(fā)育過(guò)程中起重要作用.LIM-HD蛋白相比,LMO蛋白在機(jī)體的發(fā)育中發(fā)揮了更重要的作用.此外,它還與腫瘤的發(fā)生有關(guān).現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的脊椎動(dòng)物的LMO亞家族的4個(gè)成員中,LMO1和LMO2基因表達(dá)于未成熟的T細(xì)胞中會(huì)阻止T細(xì)胞的進(jìn)一步分化和成熟,它們的不正常表達(dá)可導(dǎo)致T細(xì)胞白血病,而且LMO2的表達(dá)與病情的惡化程度成正相關(guān),進(jìn)一步研究

4、發(fā)現(xiàn)LMO2是血細(xì)胞發(fā)生的主要調(diào)節(jié)因子,它可能在多能干細(xì)胞階段發(fā)揮作用;LMO4的表達(dá)受乳腺上皮細(xì)胞的發(fā)育調(diào)節(jié),并在乳腺癌中上調(diào)表達(dá),它可與CtIP(CtBP-interacting protein)和乳腺腫瘤抑制蛋白BRCA1(Breast cancer 1)相互作用形成復(fù)合體并抑制BRCA1的活性,從而導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生;最近的研究發(fā)現(xiàn)LMO4可與Deaf-1發(fā)生相互作用,并在影響神經(jīng)管閉合的神經(jīng)通路中有重要作用;還有研究者將LMO1

5、、LMO3、LMO4基因分別敲除,發(fā)現(xiàn)不同基因缺失后小鼠的形態(tài)及功能變化不同,表明LMO亞家族中的成員分別在不同的發(fā)育途徑中有重要作用.DAT1從結(jié)構(gòu)上看屬于LMO家族,為初步了解DAT1的功能,該文應(yīng)用原位雜交、RT-PCR、熒光定量RT-PCR、神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染及酵母雙雜交法等方法,從組織、細(xì)胞、分子水平對(duì)DAT1的功能進(jìn)行較全面的研究,通過(guò)該課題的研究不僅能初步明確DAT1在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system