HPV-CT重組真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建和小鼠生殖道CT感染模型的建立.pdf

1、溫州醫(yī)學院碩士學位論文HPV-CT重組真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建和小鼠生殖道CT感染模型的建立姓名：王樂丹申請學位級別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學（性傳播疾?。┲笇Ы處煟簭堺惙?呂杰強20060301溫州醫(yī)學院碩士學位論文C ’l ’o[ 3 】 分別用1 0 7 、1 0 5 、1 0 3 數(shù)量I F U 的c T D 型株陰道內(nèi)接種雌性C 5 7 B L ／6 小鼠，接種后每隔7 d 取陰道宮頸拭子作細胞培養(yǎng)分離C T ，并進行包涵體形成單位( I

2、 F U ) 記數(shù)，連續(xù)觀察5 周。結(jié)果：[ 1 】 經(jīng)酶切和測序鑒定，獲得了重組真核表達質(zhì)粒p c D N A 3 ．1 ( + ) ／H P V 6 b L l ／C TM O M P l 5 5 ．i 6 3 。轉(zhuǎn)染哺乳細胞C O S 一7 后，通過S D S ．P A G E 和W e s t e r nb l o t 分析鑒定，在真核細胞內(nèi)成功表達了分子量約為5 6 K D a 的嵌合蛋白。[ 2 】 用G i e m s a

3、 染色、免疫層析法和核苷酸序列檢測對沙眼衣原體進行鑒定，結(jié)果均呈陽性，證實沙眼衣原體培養(yǎng)成功，并經(jīng)離心獲得了具有高度感染活性的沙眼衣原體。[ 3 】 分別用1 0 7 、1 0 5 和1 0 3 I F U 的c T 接種小鼠，發(fā)現(xiàn)在接種后的7 ～1 4 d 均可在小鼠生殖道分離得到具感染性的C T ，但其持續(xù)排菌時期與接種的I F U 數(shù)量成正比，分別為3 5 、2 8 、2 1 d ；且小鼠生殖道排菌量( I F U ) 與接種的I

4、 F U數(shù)量亦成正比，以1 0 7 和1 0 5 劑量組為高( 在7 ～1 4 d 分別可達1 0 4 和1 0 3 ) 。結(jié)論：【1 ] 成功構(gòu)建了H P V 6 b L l ／c T - M O M P l 5 5 _ 1 6 3 嵌合基因真核表達質(zhì)粒，并在哺乳細胞中表達了嵌合蛋白。為研究H P V - C T 嵌合真核基因免疫效應提供實驗基礎(chǔ)。【2 ] 成功增殖培養(yǎng)和純化C TD 型株，為建立小鼠生殖道C T 感染模型打下了基礎(chǔ)。