大潮氣量通氣致兔VILI模型建構(gòu)及IL-1β、NF-κBp65表達研究.pdf

1、第一部分大潮氣量通氣建立兔的最佳VILI實驗動物模型
　　目的：應(yīng)用大潮氣量機械通氣制作兔的最佳VILI實驗動物模型。
　　方法：根據(jù)黃金分割法原理,實驗組分三組分別采用三種不同潮氣量68mL/kg、60mL/kg和45mL/kg各持續(xù)通氣1分鐘造成兔的急性肺損傷,取0h,12h,24h,48h四個時間點進行觀察,統(tǒng)計存活數(shù)觀察兔存活情況,計算各時間點肺濕/干重比反映肺水腫嚴(yán)重程度及變化,組織病理學(xué)切片觀察各時間點肺組織形態(tài)

2、學(xué)改變。
　　結(jié)果：1、實驗組A(VT68mL/kg)、實驗組B(VT60mL/kg)和實驗組C(VT45mL/kg)兔48h存活率分別為58.33％(7/12)、91.67%(11/12)和100%(12/12)。2、與正常對照組(4.40±0.02)相比,實驗組A(VT68mL/kg)、實驗組B(VT60mL/kg)和實驗組C(VT45mL/kg)的肺濕/干重比在0小時無明顯變化,比值分別為4.46±0.08、4.48±0.0

3、8和4.43±0.12;12小時明顯增高,比值分別為5.27±0.18、4.84±0.12和4.64±0.06;在24小時時達峰值,比值分別為5.50±0.18、5.29±0.12和4.88±0.07;48小時后降低,比值分別為5.00±0.31、4.77±0.21和4.46±0.10。3、組織病理學(xué)切片顯示機械通氣后不同時間肺組織均有不同程度形態(tài)學(xué)改變,實驗組A(VT68mL/kg)肺組織形態(tài)學(xué)改變非常明顯;實驗組B(VT60mL/k

4、g)肺組織形態(tài)學(xué)改變明顯;實驗組 C(VT45mL/kg)肺組織形態(tài)學(xué)改變不明顯。
　　結(jié)論：大潮氣量通氣成功建立兔的最佳VILI實驗動物模型,建立的指標(biāo)為VT60mL/kg、RR50次/分、Fi0221%。
　　第二部分大潮氣量通氣致兔VILI后IL-1β、NF-κBp65表達研究
　　目的：在已建立的兔的VILI實驗動物模型上就以下問題進行探討:(1) VILI時炎癥因子IL-1β蛋白水平的表達規(guī)律。(2) NF-

5、κBp65活化是否參與了VILI炎癥反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制及其在蛋白水平的表達規(guī)律。(3)通過對NF-κBp65和IL-1β在蛋白水平的半定量及肺濕/干重比以統(tǒng)計學(xué)方法建立大潮氣量通氣致兔 VILI后推斷損傷時間的數(shù)學(xué)公式。
　　方法：按照已建立的實驗動物模型,以大潮氣量(60mL/kg)機械通氣1分鐘,取0h,0.5h,1h,3h,6h,12h,18h,24h,48h九個時間點觀察,計算肺濕/干重比反映肺水腫程度及規(guī)律;組織芯片應(yīng)用

6、; HE染色觀察肺組織病理學(xué)改變;免疫組織化學(xué)染色(SABC法)和免疫印跡法(Western blot)分別檢測VILI后不同時間IL-1β和NF-κBp65在肺組織中的蛋白表達規(guī)律。
　　結(jié)果：1、與正常對照組相比,肺濕/干重比在大潮氣量(60mL/kg)通氣后0.5小時急劇升高,以后逐漸升高,24小時到峰值,隨后降低。2、肉眼觀察肺組織表面可見大量小片狀的紅色或暗紅色的出血灶,鏡下可見肺組織結(jié)構(gòu)不完整,肺泡壁明顯增厚,肺泡腔和

7、肺間質(zhì)內(nèi)大量炎性細胞浸潤、紅細胞漏出及明顯肺水腫。3、免疫組織化學(xué)染色和免疫印跡法檢測 IL-1β蛋白表達,以β-actin作為內(nèi)參照,與正常對照組比較,在通氣后0.5小時表達增加,3小時達高峰,以后逐漸降低,48小時后接近正常對照組。4、免疫組織化學(xué)染色和免疫印跡法檢測NF-κBp65蛋白表達,以β-actin作為內(nèi)參照,與正常對照組比較,在通氣后0.5小時表達增加,6小時表達高峰,以后逐漸降低,在48小時后仍高于正常對照組。5、回歸

8、方程:分別以肺濕/干重比和NF-κBp65、IL-1β蛋白水平的半定量數(shù)據(jù)五個因素為自變量,肺損傷后時間為因變量,求得各自的回歸方程。
　　結(jié)論：1.大潮氣量通氣致兔急性肺損傷后,炎癥因子IL-1β早期即表達且有時間依賴性,求得的回歸方程可能適用于肺損傷后即刻至3小時之間損傷時間的推斷。
　　2.核轉(zhuǎn)錄因子NF-κBp65參與了VILI炎癥反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制且表達有時間依賴性,求得的回歸方程可能適用于肺損傷后即刻至6小時之間