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文檔簡(jiǎn)介
1、目的: 1.觀察驚厥持續(xù)狀態(tài)(SC)幼年大鼠海馬白介素1β(IL-1β)、核因子κBp65(NF-κBp65)和TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的變化;及依達(dá)拉奉對(duì)三者的變化的影響; 2.探討IL-1β和NF-κBp65在驚厥性腦損傷中的作用及其關(guān)系。 方法: 雄性SD幼年大鼠195只,分為生理鹽水對(duì)照組(NS組)、驚厥持續(xù)狀態(tài)組(SC組)和依達(dá)拉奉組(ED組)三大組;其中NS組、SC組和ED組又均隨機(jī)分為5個(gè)亞組
2、,分別于驚厥后4h、12h、24h、48h和72h處死。采用氯化鋰-匹魯卡品法制作驚厥持續(xù)狀態(tài)模型:幼年大鼠按127mg/kg劑量腹腔注射氯化鋰,18h后按1mg/kg劑量腹腔注射硫酸阿托品,30min后按100mg/kg劑量腹腔注射匹魯卡品;觀察大鼠行為學(xué)變化,記錄各組大鼠的驚厥率、驚厥潛伏期、驚厥程度分級(jí)、驚止時(shí)間及死亡情況。選擇驚厥發(fā)作達(dá)到Ⅳ~Ⅴ級(jí),且終止驚厥發(fā)作后狀態(tài)良好的大鼠為合格SC大鼠模型。ED組在大鼠造模前三天予ED5m
3、g/kg腹腔注射,每天注射一次,連續(xù)3天。NS組用生理鹽水代替氯化鋰及匹魯卡品,其他處理同SC組。大鼠于驚厥后各時(shí)間點(diǎn)處死;光鏡、電鏡和TUNEL法檢測(cè)觀察大鼠海馬病理學(xué)改變及細(xì)胞凋亡情況;免疫組化法檢測(cè)海馬CA1區(qū)IL-1β和NF-κBp65蛋白表達(dá)動(dòng)態(tài)變化;RT-PCR技術(shù)檢測(cè)海馬NF-κBp65 mRNA噠的動(dòng)態(tài)變化。 結(jié)果: 1.驚厥持續(xù)狀態(tài)模型的建立:注射匹魯卡品后,有9只(9/130)大鼠未成功誘發(fā)驚厥,20
4、只(20/130)出現(xiàn)Ⅳ發(fā)作,其余大鼠101(101/130)均誘導(dǎo)出Ⅴ級(jí)驚厥發(fā)作。造模后死亡大鼠10(10/130)只,其中2只于驚厥后4h死亡;2只于驚厥后12h死亡;1只于驚厥后24h內(nèi)死亡;3只于48h死亡;2只死于驚厥后72h;總死亡率為7.69%(10/130),造模成功率85.4%(111/130)。 2.HE染色:NS組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞層次清晰,排列整齊,神經(jīng)元輪廓清晰,胞核大而圓。SC組大鼠出現(xiàn)不同程度
5、的神經(jīng)元變性及丟失,以海馬CA1區(qū)最顯著,驚厥后4h少量神經(jīng)元腫脹;12h排列欠整齊,受累數(shù)增加;24h胞漿胞核空泡化;48h細(xì)胞不規(guī)則,見(jiàn)紅色神經(jīng)元及空穴;72h有所減輕。ED組各時(shí)間點(diǎn)總體比SC組減輕。 3.電鏡:NS組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰,胞膜及核膜完整光滑,核染色質(zhì)分布均勻,胞漿內(nèi)線(xiàn)粒體,高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器豐富。SC組表現(xiàn)為:驚厥后4h神經(jīng)元毛細(xì)血管周?chē)[,12h部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張,個(gè)別線(xiàn)
6、粒體輕度腫脹;24細(xì)胞間隙擴(kuò)張,部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線(xiàn)粒體擴(kuò)張;48h以后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張較前有所減輕,線(xiàn)粒體腫脹有加重。ED組各時(shí)間點(diǎn)改變均較SC組減輕。 4.RI-PCR檢測(cè)結(jié)果:NS組海馬NF-κBp65 mRNA表達(dá)無(wú)明顯變化,SC組于驚厥后4h開(kāi)始少量增加,24h達(dá)高峰,之后緩慢下降,72h降至正常;ED組4h、12h和24h時(shí)間點(diǎn)海馬NF-κBp65mRNA表達(dá)較SC組均明顯下降(P<0.05或P<0.01); ED組除24h時(shí)間
7、點(diǎn)外,其余各時(shí)間點(diǎn)與NS組表達(dá)無(wú)明顯差別。 5.免疫組化檢測(cè)結(jié)果: 5.1 IL-1β蛋白免疫組化檢測(cè)結(jié)果:NS組各時(shí)間點(diǎn)大鼠海馬CA1區(qū)可見(jiàn)少量IL-1β陽(yáng)性細(xì)胞。SC組于SC后12h海馬CA1區(qū)IL-1β陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多,以24h最為顯著,48h開(kāi)始減少;IOD值也均有升高,與NS組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比,IOD值差異均有非常顯著性(P均<0.01); ED組中12h~48h時(shí)間點(diǎn)IL-1β陽(yáng)性神經(jīng)元細(xì)胞均較SC組明顯減少,
8、但仍高于NS組;經(jīng)比較這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的IOD值均與SC組和NS組有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。 5.2 NF-κBp65蛋白免疫組化檢測(cè)結(jié)果:NS組各時(shí)間點(diǎn)大鼠海馬CA1區(qū)NF-κBp65蛋白少量表達(dá)。SC后4h表達(dá)開(kāi)始增加,24h達(dá)高峰,后稍下降;與NS組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比,IOD值差異均有著性(P<0.05或P<0.01); ED組中4h、12h和24h組NF-κBp65陽(yáng)性神經(jīng)元細(xì)胞均較SC組明顯減少,除4h組外其
9、余4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的IOD值仍高于NS組;經(jīng)比較ED組中4h、12h和24h時(shí)間點(diǎn)IOD值均與SC組有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。 6.TUNEL法檢測(cè)神經(jīng)元凋亡結(jié)果:NS組各時(shí)間點(diǎn)大鼠海馬CA1區(qū)均可見(jiàn)極少量TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞。SC組于SC后12h海馬CA1區(qū)TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著增加,48h達(dá)高峰,之后稍下降;ED組變化趨勢(shì)也與SC組相似,12h、24h、48h各亞組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均較SC組顯著下降(P<0.
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