CaMKII-TAK1-p38途徑在神經(jīng)干細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、目的： 研究CaMKⅡ、TAK1、p38、細(xì)胞色素C在RA誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞凋亡過(guò)程中的作用，試圖揭示RA通過(guò)MAPK途徑引起神經(jīng)干細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制，為進(jìn)一步探討RA誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞凋亡的機(jī)制以及凋亡與神經(jīng)管畸形之間的聯(lián)系提供理論依據(jù)。 方法： RA刺激神經(jīng)干細(xì)胞后，Western blot技術(shù)觀察CaMKⅡ、TAK1、p38磷酸化狀態(tài)和細(xì)胞質(zhì)中細(xì)胞色素C的變化。在給予CaMKⅡ抑制劑KN-93后，用RA刺激神經(jīng)干細(xì)

2、胞，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)及DNA Ladder檢測(cè)細(xì)胞凋亡，Western blot技術(shù)觀察CaMKⅡ、TAK1和p38的變化。 結(jié)果： 1．RA可以增加CaMKⅡ，TAK1和p38的磷酸化 用16μM的RA刺激神經(jīng)干細(xì)胞，分別設(shè)定不同的時(shí)間點(diǎn)，Western blot免疫印跡，結(jié)果顯示磷酸化的CaMKⅡ在RA作用后5min開始升高，10min達(dá)到高峰。不同的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)顯示RA也可以增加TAK1和p38的磷酸化，其達(dá)到

3、峰值的時(shí)間分別為20min，40min。 2．RA可激活CaMKⅡ-TAK1-p38途徑 RA刺激后不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行Western blot分析，TAK1和p38達(dá)到峰值的時(shí)間均在CaMKⅡ之后，表明CaMKⅡ是磷酸化的TAK1和p38的上游分子。KN-93抑制CaMKⅡ基因表達(dá)之后，再用RA刺激，Western blot檢測(cè)磷酸化的TAK1和p38的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用KN-93顯著減弱了RA引起的TAK1和p38磷酸化。

4、這些結(jié)果表明RA激活CaMKⅡ-TAK1-p38途徑。 3．RA誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)生凋亡是通過(guò)CaMKⅡ引起線粒體途徑實(shí)現(xiàn) 用CaMKⅡ的抑制劑KN-93處理神經(jīng)干細(xì)胞后，應(yīng)用流式細(xì)胞儀和DNA梯狀條帶的凝膠電泳檢測(cè)，表明KN-93可明顯的降低RA引起的凋亡。同時(shí)應(yīng)用Western blot檢測(cè)RA誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞凋亡過(guò)程中細(xì)胞色素C的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)中有細(xì)胞色素C的釋放。這些結(jié)果表明RA誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)生凋亡是由Ca