白念珠菌細(xì)胞周期及抗真菌中藥單體對(duì)其影響的研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文白念珠菌細(xì)胞周期及抗真菌中藥單體對(duì)其影響的研究姓名：吳建華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師：溫海廖萬(wàn)清20030401第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要中文摘要白念珠菌細(xì)胞周期及抗真菌中藥單體對(duì)其影響的研究近年來(lái)，深部真菌感染的發(fā)病率逐年上升，而抗真菌藥物的種類和數(shù)量相對(duì)較少以及致病真菌耐藥菌株日益增多，是目前困擾醫(yī)療工作的主要難題之一。不斷開(kāi)發(fā)高效低毒的抗真菌藥物、建立可靠的抗真菌藥物敏感性檢測(cè)方法

2、，日益引起人們的關(guān)注?；瘜W(xué)合成一種新的抗真菌化合物，周期長(zhǎng)，耗費(fèi)人力物力巨大。中醫(yī)中藥對(duì)真菌感染的治療歷史悠久，積累了豐富經(jīng)驗(yàn)，利用現(xiàn)代工藝從中草藥中分離有效的抗真菌藥物有效成分，不失為開(kāi)發(fā)新藥的便捷途徑。流式細(xì)胞儀(FCM)是綜合了多項(xiàng)現(xiàn)代技術(shù)的科學(xué)儀器，在生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)獲得了廣泛應(yīng)用。本課題旨在應(yīng)用FCM技術(shù)，通過(guò)檢測(cè)白念珠菌細(xì)胞周期，研究四種中藥單體，即小檗堿、黃芩甙、丁香酚和姜黃素，對(duì)白念珠菌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。探索

3、從中藥中分離抗真菌藥物和運(yùn)用FCM技術(shù)建立抗真菌藥物敏感試驗(yàn)方法的可能性。首先，研究了白念珠菌在自然條件下生長(zhǎng)的細(xì)胞周期變化規(guī)律。本研究發(fā)現(xiàn)白念珠菌在最初生長(zhǎng)的28小時(shí)以內(nèi)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，而后進(jìn)入穩(wěn)定生長(zhǎng)期。白念珠菌在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞以S期、G2／M期或S—G2／M期為主，在穩(wěn)定生長(zhǎng)期細(xì)胞以G期為主。本研究還首次發(fā)現(xiàn)，白念珠菌同其他真核生物細(xì)胞一樣存在凋亡現(xiàn)象，而細(xì)胞凋亡的比率不隨培養(yǎng)時(shí)間或生長(zhǎng)速率的變化而變化，保持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的值，說(shuō)

4、明白念珠菌的凋亡同樣受基因控制，外界因素對(duì)其影響很小。其次，分別研究了小檗堿、黃芩甙、丁香酚和姜黃素對(duì)白念珠菌細(xì)胞周期的影響。FCM直方圖橫軸反映了細(xì)胞DNA含量的熒光強(qiáng)度，峰值越向左表示細(xì)胞DNA的熒光強(qiáng)度減弱。與對(duì)照組相比，經(jīng)過(guò)藥物處理后的真菌細(xì)胞的熒光強(qiáng)度有所改變，圖形峰值左移。并隨著藥物濃度的升高，直方圖峰值越向左移動(dòng)，即細(xì)胞核損傷越嚴(yán)重。FCM散點(diǎn)圖縱軸Fs(前向角光散射)反映了細(xì)胞體積的大小，越向下表示細(xì)胞體積越小，橫軸反映