生長(zhǎng)分化因子-9(GDF-9)基因與骨形態(tài)發(fā)生蛋白-15(BMP-15)基因在中國(guó)漢族多囊卵巢綜合征(PCOS)患者中的突變研究.pdf

1、第一部分目的:多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是涉及多器官、多系統(tǒng)的內(nèi)分泌紊亂性疾病，臨床表現(xiàn)高度多樣化，如月經(jīng)稀發(fā)、閉經(jīng)、多毛、痤瘡、肥胖、胰島素抵抗、高脂血癥等，其病理生理特點(diǎn)為竇前卵泡發(fā)育過(guò)多而優(yōu)勢(shì)卵泡發(fā)育受阻。生長(zhǎng)分化因子-9（growth differentiation factor，GDF-9）是卵母細(xì)胞來(lái)源的生長(zhǎng)因子，屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）超家族，以自分泌和旁分泌等

2、方式參與卵泡的生長(zhǎng)、發(fā)育、成熟與排卵。最近研究發(fā)現(xiàn)PCOS 患者卵巢組織中GDF-9表達(dá)延遲且降低，提示GDF-9 異常表達(dá)參與了PCOS的發(fā)病。本研究通過(guò)對(duì)GDF-9基因的突變分析，探討其與PCOS 發(fā)病的關(guān)系。
　　 方法:1.收集多囊卵巢綜合征病人和正常對(duì)照血液標(biāo)本各200例，記錄姓名、年齡、初潮年齡、結(jié)婚年齡、月經(jīng)周期、不孕史，身高、體重等，化學(xué)標(biāo)記免疫檢測(cè)法測(cè)基礎(chǔ)性激素：雌二醇（E2），卵泡刺激素(FSH)，黃體生成素

3、(LH))，睪酮(T)，泌乳素(PRL)。2.用血液基因組DNA提取試劑盒，按照說(shuō)明從500ul外周血中程序化提取DNA。3.采用primer premeir5引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)引物，聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）特異性擴(kuò)增目的片段。4.將PCR產(chǎn)物送測(cè)序，采用DNA自動(dòng)測(cè)序儀（型號(hào)：ABI3730XL），所有產(chǎn)物均行雙向測(cè)序。
　　 結(jié)果:應(yīng)用chromas軟件對(duì)200例PCOS和200例對(duì)照的測(cè)序峰圖進(jìn)行解讀，并在GENEBANK 中

4、行結(jié)果比對(duì)，在GDF-9基因的第一和第二外顯子編碼區(qū)共發(fā)現(xiàn)10 種變異位點(diǎn)。其中7 種改變僅在PCOS 患者中出現(xiàn)，并導(dǎo)致了氨基酸的改變，屬于錯(cuò)義突變；而另外3 種變化在對(duì)照和病例中均有發(fā)現(xiàn)，屬于單核苷酸多態(tài)性變異（SNP）：c.169G>T，c.447C>T，c.546G>A。在7 種錯(cuò)義突變中，有5種首次在中國(guó)PCOS患者中發(fā)現(xiàn)：c.15C>G，c.118T>G，c.133A>G，c.1025A>T，c.1275C>A。另外兩種突變

5、（c.436C>T，c.1283G>C）已有文獻(xiàn)報(bào)道。
　　 結(jié)論:GDF-9基因突變可能與PCOS 發(fā)病有關(guān)。
　　 第二部分目的:通過(guò)對(duì)骨形態(tài)發(fā)生蛋白15（BMP-15）基因的突變分析,研究其與多囊卵巢綜合征發(fā)病機(jī)制的關(guān)系。
　　 方法:收集多囊卵巢綜合征病人和正常對(duì)照各200例，聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）特異擴(kuò)增目的基因片段，應(yīng)用DNA測(cè)序方法檢測(cè)基因突變。
　　 結(jié)果:在BMP-15基因的第一和第二外