煙酰胺對Toll樣受體介導的炎癥后色素沉著的研究.pdf

1、研究背景：
　　炎癥后色素沉著（postinflammatory hyperpigmenation，PIH）是常見的皮膚科問題，可繼發(fā)于皮膚感染、炎癥、丘疹鱗屑性疾病、外傷、藥物、日曬等各種疾病或損傷。其中以痤瘡是引起的PIH最為常見的疾病之一，其發(fā)生率可達47.4-65.3％不等。PIH在任何膚色人群中均有發(fā)生，但在暗膚色人群中更為常見，并以亞洲人群最為顯著，如日本、中國。PIH可發(fā)生于任何年齡階段，男女性發(fā)生率無明顯差別?，F(xiàn)有

2、的治療方法對PIH效果并不理想。雖然部分PIH即使不經(jīng)過治療，亦可自行消褪，但通常需要3-24個月時間不等。此外，環(huán)境因素如日曬等可進一步加重色素沉著。雖然PIH并不影響個體生存，但可在不同程度上損害容貌外觀，在精神和經(jīng)濟上對患者造成負擔。因此，探索PIH發(fā)生的機制并尋找潛在的安全有效的藥物治療是很有意義的。
　　角質(zhì)形成細胞是皮膚免疫屏障功能中的一重要組成部分，其表面表達多種Toll樣受體（Toll-like receptors

3、，TLRs）。TLRs是一組模式識別受體，可以識別病原相關(guān)分子模式。其中TLR-2主要識別革蘭氏陽性菌的細胞壁成分:肽聚糖(peptidoglycan，PGN)及脂磷壁抗原相關(guān)分子酸(lipoteichoic acid，LTA); TLR-4則主要識別革蘭氏陰性菌的細胞壁成分:脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），也即內(nèi)毒素。作為痤瘡發(fā)生的致病因素之一的痤瘡丙酸桿菌(Propionibacteriurn acnes，P

4、.acnes)是革蘭氏陽性菌，已由研究顯示P.acnes引起炎癥的主要途徑是通過其細胞壁主要成分PGN及LTA與宿主細胞表面TLR-2結(jié)合所致，也有部分報道發(fā)現(xiàn)P.acnes對于TLR-4也有弱激動效應。因此，我們可以利用PGN、LTA、LPS這些細胞壁成分干預角質(zhì)形成細胞，體外模擬痤瘡炎癥環(huán)境，在此基礎(chǔ)上探討TLR-2/4與炎癥后色素沉著的關(guān)系，并篩選治療PIH潛在有效的藥物。
　　研究目的：
　　本課題旨在討論角質(zhì)形成細

5、胞TLR-2/4介導的PIH形成機制，并在此基礎(chǔ)上篩選治療PIH潛在有效的藥物。
　　研究方法：
　　一、TLR-2/4介導的炎癥及色素合成相關(guān)因子表達
　　本部分擬用TLR-2激動劑(PGN、LTA)及TLR-4激動劑(LPS)選取不同時間點刺激HaCaT細胞，建立體外角質(zhì)形成細胞TLR-2/4介導的炎癥模型。用Realtime PCR及ELISA檢測分別TLR-2/4介導的炎癥及色素合成相關(guān)因子的表達。
　　

6、為確定不同細菌來源的細胞壁成分對TLR-2/4介導的PIH是否有差異，本課題選取不同細菌來源的PGN，用上述方法檢測炎癥及色素合成相關(guān)因子的表達。為進一步確定TLR-2/4是否直接參與PIH，用siRNA對TLR-2及TLR-4基因表達分別進行干預后，用上述方法檢測炎癥及色素合成相關(guān)因子的表達。
　　二、肌醇、泛醇、煙酰胺對TLR-2/4介導的PIH的作用
　　本部分擬用不同濃度梯度的肌醇、泛醇及煙酰胺分別作用于TLR-2/

7、4介導的PIH模型，用Realtime PCR及ELISA檢測炎癥及色素合成相關(guān)因子的表達，確定潛在有效的藥物及其有效濃度范圍。
　　研究結(jié)果：
　　一、TLR-2/4介導的炎癥及色素合成相關(guān)因子的表達
　　用TLR-2激動劑(PGN、LTA)及TLR-4激動劑(LPS)刺激HaCaT細胞，IL-8mRNA表達在0-12h時隨時間增加而增加(p＜0.05 vs.control)，在12-24h時表達水平略有下降，但與對

8、照相比，仍呈顯著性升高(p＜ 0.05 vs.control)。而在相同時間點內(nèi)，IL-8 mRNA表達在LPS及PGN組中升高較LTA組明顯。類似地，POMC mRNA表達在0-24h時隨時間增加而增加，在24h時表達水平最高(p＜0.05 vs.control)。同樣地，在相同時間點內(nèi)，POMC mRNA表達上調(diào)以LPS組及PGN組更為明顯。
　　為確定不同細菌來源的細胞成分對TLRs介導的PIH是否有影響，我們采用了金黃色葡

9、萄球菌細胞壁中的PGN（PGN from Staphylococcus aureus，PGN-SA）以及大腸埃希菌細胞壁中的PGN（PGN from Esherichia coli，PGN-EB），分別干預HaCaT細胞，發(fā)現(xiàn)兩組IL-8 mRNA及POMC mRNA水平無顯著性差異(p＞0.05)。
　　結(jié)論：TLR-2/4激動劑可顯著性誘導炎癥因子IL-8黑素合成因子POMC的高表達;不同細菌來源的TLR-2激動劑對炎癥及黑素

10、合成相關(guān)因子表達無顯著性差異，因此可推測痤瘡相關(guān)的PIH與TLR-2/4信號通路途徑激活相關(guān)，色素沉著是機體在維持炎癥穩(wěn)態(tài)過程中所付出的代價。
　　二、肌醇、泛醇、煙酰胺對TLR-2/4介導的PIH的作用
　　將肌醇及泛醇按照不同濃度梯度分別加入到PGN誘導的PIH模型中發(fā)現(xiàn)，隨兩者濃度的增加，IL-8及POMC mRNA水平無顯著變化(p＞0.05);而將煙酰胺按照不同濃度梯度加入到PGN誘導的PIH模型中后發(fā)現(xiàn)，IL-8