雷米普利與曲美他嗪對(duì)慢性心力衰竭大鼠腎臟細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、心力衰竭是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，除了心臟自身功能及構(gòu)造的損傷，還合并全身其他臟器的功能損害，尤其是腎臟。因心臟與腎臟共同參與調(diào)節(jié)體液循環(huán)及血流動(dòng)力學(xué)，故能夠彼此相互影響。雷米普利(Ramipril,RAM)是臨床常用的ACEI類擴(kuò)血管藥物，曲美他嗪（Trimetazidine，TMZ)是通過影響心肌能量代謝而改善心肌缺血的藥物。RAM與TMZ兩種藥物在腎臟保護(hù)方面仍在進(jìn)一步研究。該實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)各組大鼠腎臟細(xì)胞中細(xì)胞色素C(Cyto

2、chromeC,Cyt-C)、Bcl-2和Bax的表達(dá)水平,并分析雷米普利與曲美他嗪?jiǎn)为?dú)以及聯(lián)合應(yīng)用可能對(duì)慢性心力衰竭大鼠腎臟細(xì)胞凋亡所產(chǎn)生的影響。
　　目的：實(shí)驗(yàn)心衰大鼠模型經(jīng)腎上腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)實(shí)施。確認(rèn)心衰模型成功后進(jìn)行藥物干預(yù)，經(jīng)過蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin,HE）染色觀察大鼠腎臟組織的病理改變，原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法(TUNE法)檢測(cè)腎臟細(xì)胞凋亡趨勢(shì)，免疫組織化學(xué)法(SP)和Western法對(duì)Cytoc

3、hrome C蛋白、Bcl-2和Bax蛋白在慢性心力衰竭大鼠腎臟組織中的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，RT-PCR法檢測(cè)Cytochrome C、Bcl-2和Bax三者的mRNA表達(dá)水平，探究雷米普利和曲美他嗪?jiǎn)为?dú)應(yīng)用以及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)慢性心衰大鼠腎臟細(xì)胞凋亡發(fā)生的影響。
　　方法：
　　1、雄性潔凈級(jí)Wistar大鼠50只，在50只大鼠中隨機(jī)選取10只大鼠作為空白對(duì)照組，其余實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行腹主動(dòng)脈縮窄手術(shù)。左室舒張末壓（LVEDP）大于等于15

4、mmHg被設(shè)為成功造模標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)對(duì)空白對(duì)照組大鼠只進(jìn)行剝離出腹主動(dòng)脈而不結(jié)扎。完成造模后將大鼠隨機(jī)分為模型組、雷米普利組、曲美他嗪組和聯(lián)合用藥組。
　　2、各組大鼠分別達(dá)到觀察終點(diǎn)時(shí)，各個(gè)大鼠的LVEDP使用多導(dǎo)電生理記錄儀測(cè)量并詳細(xì)準(zhǔn)確地記錄結(jié)果。開腹取各大鼠腎臟，稱重。
　　3、采用HE染色觀察各個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的腎臟組織病理學(xué)改變。
　　4、運(yùn)用TUNEL法檢測(cè)腎臟細(xì)胞凋亡情況并計(jì)算細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）。
　　5

5、、SP法、Western法檢測(cè)大鼠腎臟組織Cyt-C、Bcl-2和Bax三者的蛋白表達(dá)情況。
　　6經(jīng)RT-PCR法測(cè)定各組大鼠Cyt-C、Bcl-2和Bax三者的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、LVEDP結(jié)果：空白對(duì)照組、模型組、雷米普利組、曲美他嗪組和聯(lián)合用藥組大鼠的LVEDP分別為：（5.63±0.98）mmHg、（19.62±1.91）mmHg、（12.24±1.43）mmHg、（12.03±1.23）

6、mmHg、（7.48±1.41）mmHg。模型組及用藥組大鼠的LVEDP與對(duì)照組相比較均有所上升(P＜0.01)。和模型組比較，用藥組大鼠的LVEDP明顯下降(P＜0.01)，聯(lián)合用藥組下降最明顯(P＜0.01)，雷米普利組和曲美他嗪組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　2、HE染色觀察實(shí)驗(yàn)對(duì)象腎臟組織的病理形態(tài)學(xué)改變：空白對(duì)照組大鼠腎小球及腎小管細(xì)胞形態(tài)正常，排列規(guī)整、緊密，結(jié)構(gòu)清晰；模型組大鼠腎臟細(xì)胞腫脹、脫落，排列疏松，

7、結(jié)構(gòu)紊亂；用藥組較模型組均有改善，且聯(lián)合用藥組改善最顯著。
　　3、TUNEL法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組大鼠的腎臟細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）結(jié)果顯示：空白對(duì)照組、模型組、雷米普利組、曲美他嗪組和聯(lián)合用藥組大鼠的AI結(jié)果分別是(2.62±0.84)％，(40.82±1.31)%，(20.02±1.14)%，(20.10±1.20)%，(14.27±1.40)%。模型組及用藥組大鼠與空白對(duì)照組大鼠的AI比較均明顯增高(P＜0.01)，與模型組比較，用藥

8、組 AI均明顯降低(P＜0.01)，且聯(lián)合用藥組降低最明顯(P＜0.01)。
　　4、用SP法檢測(cè)各組實(shí)驗(yàn)大鼠腎臟組織中Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)水平：Bcl-2蛋白在各組大鼠腎小管細(xì)胞中的表達(dá)趨勢(shì)為：對(duì)照組強(qiáng)陽性：細(xì)胞內(nèi)在鏡下顯示含有較多棕黃色物質(zhì)，模型組無明顯陽性反應(yīng)，用藥組均可見陽性反應(yīng)，但陽性強(qiáng)度弱于對(duì)照組，聯(lián)合用藥組較單用藥組陽性反應(yīng)較強(qiáng)。Bax蛋白表達(dá)結(jié)果顯示：對(duì)照組大鼠腎小管細(xì)胞內(nèi)無明顯棕黃色顆粒；模型組大鼠細(xì)胞內(nèi)

9、則有明顯棕黃色顆粒沉積，用藥組陽性反應(yīng)弱，聯(lián)合用藥組最弱。
　　5、Western法檢測(cè)各組大鼠腎組織Cyt-C蛋白表達(dá)情況：空白對(duì)照組、模型組、雷米普利組、曲美他嗪組和聯(lián)合用藥組大鼠的Cyt-C表達(dá)結(jié)果是0.32±0.12，2.53±0.10，1.50±0.11，1.58±0.12，0.75±0.06，后四組與空白對(duì)照組大鼠比較Cyt-C蛋白表達(dá)水平均明顯增高(P＜0.01)，與模型組比較，用藥組其均明顯降低(P＜0.01)，且

10、聯(lián)合用藥組降低最明顯(P＜0.01)。
　　6、RT-PCR法檢測(cè)各組大鼠中Cyt-C、Bcl-2和Bax的mRNA在腎臟細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平：Cyt-C、Bax mRNA在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)趨勢(shì)相似，與空白對(duì)照組相比，二者在模型組大鼠中的表達(dá)水平均為升高趨勢(shì)（P＜0.01），用藥組中二者的mRNA水平較模型組明顯降低（P＜0.01），聯(lián)合用藥效果最佳，但二者的表達(dá)水平仍高于空白對(duì)照組。與空白對(duì)照組比較，其余四組中Bcl-2mRNA水平則明

11、顯的下降（P＜0.01），其中模型組Bcl-2 mRNA的表達(dá)水平最低（P＜0.01），用藥組中聯(lián)合用藥組的Bcl-2 mRNA表達(dá)水平最高。三者在雷米普利組與曲美他嗪組中的mRNA表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、慢性心力衰竭大鼠腎功能損害與細(xì)胞凋亡的發(fā)生密切相關(guān)。
　　2、雷米普利與曲美他嗪可能通過抑制細(xì)胞凋亡發(fā)生而保護(hù)心衰大鼠的腎功能，且兩者同時(shí)使用的效果優(yōu)于分別用藥的效果，故兩者擁有協(xié)