內(nèi)異消對鼠子宮內(nèi)膜異位癥的治療作用及其免疫學(xué)機(jī)制初探.pdf

1、子宮內(nèi)膜異位癥(內(nèi)異癥，EMs)是指具有生長功能的子宮內(nèi)膜組織生長在子宮腔以外的其他部位而產(chǎn)生的病變。EMs是育齡婦女的常見病，發(fā)病率在育齡婦女中約為10～15％，在不孕婦女中的發(fā)病率約占50％。臨床表現(xiàn)為痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)、腹腔疼痛、性交疼痛、不孕等。EMs的發(fā)病機(jī)理并不明確，經(jīng)血逆流學(xué)說與異常的腹腔免疫環(huán)境被認(rèn)為是EMs發(fā)生發(fā)展的重要因素。逆流進(jìn)腹腔的子宮內(nèi)膜細(xì)胞逃脫了免疫細(xì)胞的監(jiān)視，被“允許”在腹腔中種植。內(nèi)異癥患者異位組織、血液及腹

2、腔液中受核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB途徑調(diào)控的IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及 TGF-β1等炎癥因子的含量顯著升高，這些炎癥因子在異位組織侵襲、粘附、異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖、異位組織血管生成等方面都起到了促進(jìn)作用。巨噬細(xì)胞作為腹腔中占主導(dǎo)地位的免疫細(xì)胞，在內(nèi)異癥的形成和發(fā)展中扮演著重要角色。內(nèi)異癥患者腹腔巨噬細(xì)胞數(shù)量增多，抗原遞呈能力減弱，吞噬能力減弱，分泌能力增加。這些變化促進(jìn)了內(nèi)異癥的發(fā)生發(fā)展。
　　 內(nèi)異消是課題組自主

3、創(chuàng)制的抗子宮內(nèi)膜異位癥的中藥新藥，由川芎嗪、阿魏酸、延胡索乙素3種中藥單體有效成分組成的復(fù)方藥物，已申報(bào)國家技術(shù)發(fā)明專利，并得到科技部“重大新藥創(chuàng)制”重慶孵化基地專項(xiàng)資助。本研究觀察內(nèi)異消對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的治療作用，并以免疫環(huán)境為切入點(diǎn)，以動物整體實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探討藥物作用機(jī)制。為內(nèi)異消提供抗子宮內(nèi)膜異位癥的主要藥效學(xué)及其作用機(jī)制的試驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 目的:觀察內(nèi)異消對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的治療作用及對相關(guān)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用，為

4、將內(nèi)異消研制成為抗子宮內(nèi)膜異位癥的中藥新藥提供主要藥效學(xué)試驗(yàn)依據(jù)，并闡釋其在免疫調(diào)節(jié)方面的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 (1)造模及模型成功標(biāo)準(zhǔn)選取性周期正常的SD大鼠，于動情期采用自體移植法，取子宮內(nèi)膜組織縫于腹腔壁上，建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型。28天后，游標(biāo)卡尺測量移植物長、寬、高，以移植物長大體積≥8mm3且表面有血管生成，隨機(jī)抽取異位組織進(jìn)行病理檢測，證實(shí)是存活的子宮內(nèi)膜組織為模型成功標(biāo)準(zhǔn)。
　　 (

5、2)分組與給藥取造模成功的大鼠隨機(jī)分為空白組，模型組，孕三烯酮組，內(nèi)異消0.18 g·kg-1組，0.09 g·kg-1組，0.045 g·kg-1組。用藥前經(jīng)SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析，各組間異位組織體積無顯著差異(P>0.05)。連續(xù)灌胃給藥28天，每天1次。
　　 (3)內(nèi)異消抗大鼠子宮內(nèi)膜異位癥療效觀察給藥28天后，測量異位組織體積，觀察給藥后異位組織體積，給藥前后異位組織體積變化及體積變化率；常規(guī)HE染色，觀察異位組織形

6、態(tài)變化；取脾臟組織稱重，計(jì)算脾臟指數(shù)。
　　 (4)內(nèi)異消對子宮內(nèi)膜異位癥大鼠炎癥因子的影響給藥28天后，乙醚麻醉大鼠，取血、腹腔液及異位組織；ELISA法檢測血清及腹腔液中TNF-α、IL-1β的含量；免疫組織化學(xué)法檢測異位組織中IL-6、IL-8、TGF-β1及 IκBα的表達(dá)，以陽性表達(dá)個(gè)數(shù)為觀察指標(biāo)；Western blot法檢測異位組織中IκBα的表達(dá)。
　　 (5)內(nèi)異消對子宮內(nèi)膜異位癥大鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的

7、影響給藥28天后，于末次給藥30分鐘后乙醚麻醉大鼠，取血，分別制備空白組，模型組，孕三烯酮組，內(nèi)異消0.18 g·kg-1灌胃給藥組、內(nèi)異消0.09 g·kg-1灌胃給藥組、內(nèi)異消0.045g·kg-1灌胃給藥組含藥血清。取血后分別取各組大鼠腹腔巨噬細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)，除空白組外，各組加入10μg·mL-1LPS刺激，同時(shí)分別給予相應(yīng)各組含藥血清。采用MTT法檢測巨噬細(xì)胞增殖能力，中性紅法檢測巨噬細(xì)胞吞噬能力，ELISA法檢測上清液中TNF-

8、α、IL-1β含量，western blot檢測巨噬細(xì)胞中IκBα的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)內(nèi)異消對內(nèi)異癥大鼠異位組織及脾臟指數(shù)的影響與模型組比較，內(nèi)異消0.18 g·kg-1，0.09 g·kg-1，0.045 g·kg-1能夠顯著減小內(nèi)異癥大鼠異位組織體積，且抑制率與藥物劑量呈正相關(guān)。顯微形態(tài)顯示：與模型組比較，內(nèi)異消0.18 g·kg-1，0.09 g·kg-1，0.045 g·kg-1組能夠減輕異位組織

9、病理改變程度，異位內(nèi)膜功能層變薄，細(xì)胞結(jié)構(gòu)變松散。與模型組相比，內(nèi)異消0.18 g·kg-1組能夠顯著增加大鼠脾臟指數(shù)。
　　 (2)內(nèi)異消對內(nèi)異癥大鼠異位組織中炎癥因子的影響免疫組化法觀察顯示，與模型組比較，內(nèi)異消0.18 g·kg-1，0.09 g·kg-1，0.045 g·kg-1能夠顯著減少異位組織中IL-6、TGF-β1的表達(dá)，增加IκBα的表達(dá)，內(nèi)異消0.18 g·kg-1，0.09 g·kg-1能夠顯著減少異位組織

10、中IL-8的表達(dá)；W-B法觀察結(jié)果顯示內(nèi)異消0.18 g·kg-1，0.09 g·kg-1，0.045 g·kg-1能夠增加IκBa的表達(dá)。
　　 (3)內(nèi)異消對內(nèi)異癥大鼠血液及腹腔液中炎癥因子的影響內(nèi)異消0.18g·kg-1，0.09 g·kg-1能夠顯著減少血液及腹腔液中TNF-α、IL-1β的含量。
　　 (4)內(nèi)異消含藥血清對內(nèi)異癥大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的影響與模型組比較，內(nèi)異消0.18 g·kg-1，0.09g·kg

11、-1，0.045g·kg-1灌胃給藥組含藥血清對腹腔巨噬細(xì)胞數(shù)量無顯著影響，顯著減少上清液中TNF-α、IL-1β含量，顯著提高巨噬細(xì)胞中IκBα的含量，0.18 g·kg-1灌胃給藥組含藥血清能夠顯著提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力。
　　 結(jié)論:
　　 (1)內(nèi)異消能夠顯著減小內(nèi)異癥大鼠異位組織體積，減輕異位組織病理改變。其機(jī)制可能是通過抑制IκBα降解，調(diào)節(jié)NF-κB核轉(zhuǎn)錄途徑，從而減少異位組織、中炎癥因子的表達(dá)；通過減少血