新型人血清白蛋白和干擾素α2b融合蛋白的成藥性研究.pdf

1、慢性乙型病毒性肝炎以其發(fā)病率高，復(fù)發(fā)性高，成為目前很難治愈的疾病之一。干擾素α2b對其具有很好的療效，但由于它在人體內(nèi)的半衰期短，必須多次大劑量給藥才能達(dá)到一定的效果，使其臨床應(yīng)用受到限制。 本實驗是基于目前進(jìn)入臨床Ⅲ期實驗的長效干擾素HSA-IFN-α2b(Albuferon)為研究對象，研究發(fā)現(xiàn)該融合蛋白有不均一性、不穩(wěn)定性以及回收率低等分子缺陷，在此基礎(chǔ)上對其進(jìn)行分子結(jié)構(gòu)改造而構(gòu)建出新型融合蛋白IFN-α2b-HSA(C3

2、4S)，并對其成藥性(藥物代謝動力學(xué)，免疫原性等)進(jìn)行了初步研究。 本實驗通過改變?nèi)诤系鞍紫辔缓突螯c突變等技術(shù)構(gòu)建了新型融合蛋白IFN-α2b-HSA(C34S)；通過對新型融合蛋白IFN-α2b-HSA(C34S)和Albuferon融合蛋白HSA-IFN-α2b進(jìn)行還原與非還原SDS-PAGE電泳比較；考察兩種純化樣品在4℃儲存條件下的穩(wěn)定性差異；將新型融合蛋白IFN-α2b-HSA(C34S)進(jìn)行125Ⅰ標(biāo)記，通過對SD

3、大鼠的皮下和靜脈注射考察其藥代動力學(xué)價值；通過對三種品系小鼠(KM、C57、BLAB/C)注射新型融合蛋白IFN-α2b-HSA(C34S)和Albuferon融合蛋白HSA-IFN-α2b，進(jìn)而從小鼠收集得到相應(yīng)的抗血清，采用ELISA間接法測抗體技術(shù)比較兩種抗血清中產(chǎn)生抗體的差異，最終獲得兩種融合蛋白的免疫原性、抗原性和抗原表位產(chǎn)生等對比結(jié)果。 結(jié)果顯示，通過改變?nèi)诤系鞍紫辔缓突螯c突變等技術(shù)構(gòu)建的新型融合蛋白IFN-α2b

4、-HSA(C34S)具有更高的穩(wěn)定性和均一性；并且新型融合蛋白IFN-α2b-HSA(C34S)具有更低的免疫原性，并消除了Albuferon融合蛋白的一些抗原表位，藥代動力學(xué)研究的結(jié)果為今后的臨床研究提供準(zhǔn)確的參照標(biāo)準(zhǔn)。 最終，本實驗成功的構(gòu)建了新型長效人血清白蛋白和干擾素α2b融合蛋白：IFN-α2b-HSA(C34S)，該新型融合蛋白不僅克服了Albuferon融合蛋白穩(wěn)定性和均一性差的缺陷，而且具有類似的半衰期和更低的免