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1、江南大學(xué)碩士學(xué)位論文人白介素2人血清白蛋白融合蛋白的發(fā)酵與純化研究姓名:李波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專(zhuān)業(yè):微生物學(xué)指導(dǎo)教師:李華鐘20090801Abs缸actAbstractHumaninterleukin2(IL2)iSanimportantimmunefactorwhichwasproducedbyactivatedauxiliaryTcellsItwasappliedtotreattumorhepatitis,immunodefici
2、encydiseaseinclinicInordertoprolongthehalflifeandimprovetreatmentefficiencytheplasmidpPIHwhichharboredtheencodinggeneofrecombinatedhumaninterleukin2andhumanserumalbumin(rhIL2HS心fusionproteinhadbeenconstructedandexpressed
3、inPpastorisGSl15OnthebasisoftheseresultsthecultureconditionsofPpastorisGS115/pPIHinshakeflasksandfermentorswereresearchedThepurificationmethodsofrhIL2HSAanditsbiologicalactivitywerealsoinvestigatedinthispaperByorthogonal
4、experiments,mediumcompositionWasdeterminedas409/Lglycerol,159/Lyeastextract,209/Lpeptone,100mmol/LphosphatebufferofpH60,O459/LMgS04,0759rcFeS04,0759/LMnS04。Intheinductionphase,theoptimalconditionswasconfirmedthroughortho
5、gonalexperimentsas“15%(v/v)methanolasinducer1:03volumeratioofgrowthphasetoinductionphase,inducedatpH65for4daysUndertheseconditions,theproductionofrhIL2HSAwas3382mg/LTheeffectsofdissolvedoxygen,methanolfedmanner,andpHonth
6、eproductionoffusionproteinWasstudiedin5LfermentorwithorganicandinorganicnitrogenmediumTheresultsshowedthattheproductionofrhIL2HSAWas712mg/LinorganicnitrogenmediumwhiletheproductionWas1469/LininorganicnitrogenmediumInaddi
7、tionthecostWasreducedgreatlywhiletheinorganicnitrogenmediumWasusedThepurificationmethodofrhIL2HS;AwasestablishedSupematantwascondensedbyultrafilterafterfermentationbrothWascentrifugedHighlypurifiedrML一2HSAwasseparatedbyB
8、lueSepharose,OctylSepharoseandDEAEionexchangechromatography111etotalrecoveryofrML2HSAWas164%ThepurifiedproductshowedasinglebandinSDSPAGEanalysisanditspurityWasidentifiedas95%bvHPLCThepurifiedfusionproteincouldreactwithan
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