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文檔簡介
1、碩士學位論文重組人血清白蛋白在漢遜酵母中的表達與純化ExpressionandPurificationofRecombinantHumanSerumAlbumininHansenulapolymorpha作者姓名:孟且紅學科、專業(yè):生物生匕王學號:5蛆18Q籃指導教師:包丞盟副茲授完成日期:2Q逝璽11耳12目大連理工大學DalianUniversityofTechnology重組人血清白蛋白在漢遜酵母中的襲達與純化Expression
2、andPurificationofRecombinantHumanSerumAlbumininHansenulapolymorphaAbstractHumanserumalbumin(HSA)playsallimportantroleinclinicaltherapyAtpresent,HSApreparedfromhumanplasmaislimitedinsupplyandthereisthepotentialriskofconta
3、minationoftheproductbyblooddrivedpathogensItisofgreatsignificancetoproductrecombinantHSAbygeneticengineeringmeansHansenulapolymorphaaSwellasPichiapastorisiscapableofgrowingwitllmethanolasitssolecarbonandenergysourceBased
4、onHansenulapolymorpha警geneticcodonusagebias,theoptimizedgeneofHSAwassynthesizedandclonedintoHansenulapolymorphaexpressionvectorpDGXMPTl0toconstructrecombinantHSA(rHSA)expressionplasmidAftertransformedintoHansenulapolymor
5、phastrainbyelectropomtionthetransformantswerescreenedonMDmediumforURA3pheno一typeThehighexpressionstrainwasselected瓠themethodsofSDSPAGEandWesternblottingFed—batchfermentationprocess、wasexploredina30L—fermenter硪曲estexpress
6、ionlevelof10339/Lwasachievedat61一hpostinducton,whereaftertheproteolyticdegradationofrHSAturnedobviouslyTheconcentrationofrHSAdecreasedtoalowlevel150hafterinductionTherHSAWaSpurifiedbystreamlineSPexchangechromatography、ph
7、enylBiosep6FFhydrophohicinteractionchromatographyandDEAEsepharoseexchangechromatographyElectrophoresis—gradeproteinWasobtainedDilutingthepurifiedproteintoappropriteconcentration,weimmunizedseveralgroupofmiceandserawereco
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