人血清白蛋白與G-CSF融合蛋白在畢赤酵母中的表達及表達產(chǎn)物的純化與鑒定.pdf

1、粒細胞集落刺激因子(granulocytecolony-stimulatingfactor，G-CSF)是一種分泌性多肽，具有174個氨基酸，分子量大約是18kD。它最初是從癌細胞中分離得到，它的基因通過基因工程技術已經(jīng)在不同宿主細胞中被克隆、測序、表達。G-CSF能刺激骨髓干細胞分化、增殖，形成粒細胞。G-CSF能啟動機體保護機制抗感染，主要是通過提高多形核中性白細胞和它們的分化成熟形細胞數(shù)量。G-CSF能激活人體的預防功能，在不同的

2、病態(tài)環(huán)境下如中性粒細胞異常偏低或免疫系統(tǒng)低下。例如，在癌癥化療后，移植特別是骨髓移植或者在白細胞減少情況下6-CSF都可起到作用。但是，G-CSF存在給藥后會被快速降解，半衰期短的缺陷。G-CSF的這種性質(zhì)對于提高其生物效能是一個障礙。 為了延長G-CSF在體內(nèi)作用的半衰期，本研究設計了一種G.CSF與人血清白蛋白(human-serumalbumin，HSA)的融合蛋白。HSA是由585個氨基酸組成的單鏈無糖基化的蛋白質(zhì)，分子

3、質(zhì)量為66.5kD。作為血漿的重要成分之一，HSA是許多內(nèi)源因子和外澡藥物的載體，正常情況下不易透過腎小球。在血漿中的半衰期長達2周，體內(nèi)分布極廣而且沒有酶學和免疫學活性，因而是一種理想的生物活性蛋白載體。通過基因工程技術將HSA基因與G.CSF基因相連接，使G.CSF在不喪失生物活性的情況下，在血漿中的半衰期能夠得到顯著地延長。從而，HSA—G-CSF融合蛋白就可降低給藥頻率和劑量，卻能發(fā)揮出與G.CSF相似的藥效作用，具有較好的應用

4、前景，并為進一步研究蛋白類藥物的長效性提供依據(jù)。 經(jīng)過westernblotting、等電聚焦、氨基酸測序、質(zhì)譜分析及圓二色譜分析等方法證實畢赤酵母表達的HSA—G.CSF融合蛋白具有正確的HSA和G-CSF結(jié)構(gòu)；NFS-60細胞增殖實驗證明HSA.G-CSF融合蛋白具有與G.CSF相同的生物學活性；小鼠的藥代動力學實驗顯示HSA.G.CSF融合蛋白延長了G.CSF在體內(nèi)作用的半衰期，降低了清除率，從而證實HSA.G.CSF融合