MAGE-3多肽納米疫苗的制備及其對小鼠胃癌種植瘤的抑瘤效應(yīng).pdf

1、研究背景：腫瘤的發(fā)病率較高，部分患者經(jīng)綜合治療后仍不免復發(fā)和轉(zhuǎn)移，預后不佳。如何消滅微小轉(zhuǎn)移灶，抑制殘余腫瘤細胞的生長等是亟需解決的問題。常規(guī)治療手段都存在各自的缺陷，生物治療作為第四種治療模式，因其具有特異性強，毒副作用低，對機體損傷小等優(yōu)點，受到了廣泛的重視。 腫瘤疫苗是極具前景的研究方向之一，其應(yīng)用成功將對腫瘤的預防及治療產(chǎn)生巨大的意義，而多肽疫苗是目前研究最多的腫瘤治療性疫苗之一。與腫瘤細胞疫苗、基因工程疫苗等傳統(tǒng)疫苗相

2、比，多肽疫苗具有特異性高、安全、設(shè)計方便、能大量合成高純度的高度可重復性肽等優(yōu)點，因而已成為腫瘤治療性疫苗研究的熱點，是一種具有廣闊應(yīng)用前景的腫瘤免疫治療方法。但其分子量小，易在體內(nèi)降解，免疫原性低，需要一種合適的載體材料克服此弊病。納米顆粒是一類極具開發(fā)潛力的新型疫苗載體，運用納米顆粒作為載體克服了傳統(tǒng)疫苗的許多缺陷和無法解決的問題，其對抗原起保護作用，可防止其在體內(nèi)新陳代謝過程中過早降解，延長抗原在體內(nèi)的滯留時間，有利于提高免疫效應(yīng)

3、。且因納米粒子非常小，一旦注射后可經(jīng)皮膚的細胞外基質(zhì)，沿直線到達區(qū)域淋巴結(jié)，此處可激活的樹突狀細胞濃度將數(shù)千倍于其在皮膚中的濃度，由此誘發(fā)的免疫效應(yīng)強烈且有效，具有一定的“淋巴靶向性”。但是傳統(tǒng)的納米材料生物相容性差，在體內(nèi)不易降解，各種具有特殊性能的納米顆粒在制備工藝上需要高溫、有機溶劑、乳化劑或表面活性劑，易造成蛋白/多肽分子活性破壞，極大地限制了其在醫(yī)藥疫苗載體中的應(yīng)用。 目的：設(shè)計合適的表位多肽抗原；獲得良好的負載多肽納

4、米載體；探討納米介導的MAGE—3多肽納米疫苗對小鼠胃癌種植瘤的抑瘤效應(yīng)。 方法：采用化學偶聯(lián)法合成殼聚糖—脫氧膽酸兩親性共聚物，紅外光譜分析(FTIR)及核磁共振分析(1H NMR)對共聚物進行結(jié)構(gòu)表征。 采用芘熒光探針法測定共聚物臨界聚集濃度(CAC)，透射電子顯微鏡(TEM)觀察殼聚糖—脫氧膽酸納米顆粒的微觀形態(tài)及粒徑，動態(tài)光散射法(DLS)測定其流體力學直徑。 由計算機軟件輔助設(shè)計，參考MAGE—3多肽體

5、外鑒定實驗，設(shè)計含有MHC—Ⅰ及MHC—Ⅱ類分子限制性MAGE—3表位多肽抗原。 通過自組裝構(gòu)建制備負載多肽的納米顆粒，用Zeta電位法測定多肽負載前后電荷變化。 采用熒光分光光度法測定負載前后多肽的含量，計算負載率、載藥量并研究其釋放規(guī)律。 構(gòu)建胃癌種植瘤模型，皮下注射給藥，觀察腫瘤體積大小的變化，繪制腫瘤生長曲線圖，并采用單因素方差分析及秩和檢驗進行相關(guān)統(tǒng)計分析。記錄小鼠的生存時間，采用Log—rank檢驗統(tǒng)

6、計分析各組生存期有無差異，并繪制Kaplan—Meier生存曲線。所有統(tǒng)計過程均由SPSS13.0完成。 結(jié)果： 1)紅外光譜(FTIR)及核磁共振分析(1H NMR)證明脫氧膽酸與殼聚糖發(fā)生了偶聯(lián)，形成了Chit—DC共聚物。 2) Chit—DC在PBS6.2緩沖溶液中能夠形成膠束，CAC值為0.12 mg/mL。 3)透射電鏡觀察示Chit—DC顆粒呈約30-50 nm的粒子，動態(tài)光散射法測定Chi

7、t—DC顆粒的流體力學半徑約200 nm。 4) Zeta電位測定法測定負載后納米顆粒的電位為13.8。 5)納米載體的負載率及載藥量分別為37.3％，17.0％。 6)載藥納米顆粒中的多肽抗原約在48h后釋放完全。 7)單因素方差分析顯示載疫苗納米顆粒與空白納米組、PBS組相比，腫瘤體積在觀察后期有統(tǒng)計學意義，其與多肽+IFA組相比，無統(tǒng)計學差異。多肽納米組相對腫瘤增殖率(％)為37.81。 8