PI3K信號通路對GES-1、BGC-823細胞系中磷酸化P27蛋白表達和分布的影響.pdf

1、目的:1、研究P27蛋白及三種磷酸化P27蛋白(p-P27(Thr187)、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10))在GES-1、BGC-823兩細胞系的表達及分布差異。2、研究PI3K信號通路在GES-1、BGC-823細胞系中對P27蛋白、p-P27(Thr187)、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)的表達及分布的影響。
　　 方法:培養(yǎng)人胃黏膜上皮永生化細胞系GES-1及人胃癌細胞系BGC-

2、823,以流式細胞術測定各自的細胞周期分布。以Westernblotting測定兩種細胞總蛋白、漿蛋白、核蛋白中P27及P-P27(Thr187)、P-P27(Thr157)、P-P27(Ser10)的含量及分布特點。以PI3K信號通路特異性阻滯劑LY294002處理兩種細胞系,再以流式細胞術測定細胞周期,Westernblotting測定目的蛋白在細胞總蛋白及核、漿中的表達及分布。所得結(jié)果輸入SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析。

3、　　 結(jié)果:
　　 1、對比GES-1、BGC-823兩細胞系,在細胞總蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr187)、P-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)的表達均有統(tǒng)計學差異(P=0.000；P=0.000；P=0.000；P=0.000)。在細胞漿蛋白中,P27蛋白、P-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)表達的差異有統(tǒng)計學意義(P=0.001；P=0.000；P=0.000),而P-P27(T

4、hr187)表達無統(tǒng)計學意義(P=0.052)。在細胞核蛋白中,P27蛋白、P-P27(Thr187)、p-P27(Ser10)表達的差異有統(tǒng)計學意義(P=0.001；P=0.000；P=0.000),而p-P27(Thr157)表達無統(tǒng)計學意義(P=0.288)。兩細胞系周期分布差異明顯(P=0.003)。
　　 2、GES-1細胞系經(jīng)LY294002作用后,在細胞總蛋白中,P27蛋白及p-P27(Thr187)、P-P27(

5、Thr157)、P-P27(Ser10)的表達量變化均無統(tǒng)計學意義(P=0.651；P=0.482;P=0.357；P=0.070)。在細胞漿蛋白中,P-P27(Thr187)、P-P27(Ser10)表達量變化無統(tǒng)計學意義(P=0.053；P=0.056),而P27蛋白和P-P27(Thr157)表達量則變化顯著(P=0.013；P=0.002)。在細胞核蛋白中,P27蛋白及P-P27(Thr187)、P-P27(Thr157)、P-

6、P27(Ser10)表達量均無統(tǒng)計學差異(P=0.558；P=0.140；P=0.223；P=0.052)。給予處理前后細胞周期變化無統(tǒng)計學意義(P=0.392)。
　　 3、BGC-823細胞系經(jīng)LY294002作用后,在細胞總蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)表達量均變化顯著,差別有統(tǒng)計學意義(P=0.000；P=0.001；P=0.000),而p-P27(Thr187)表達量無統(tǒng)計學變

7、化(P=0.254)。在細胞漿蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)表達量變化顯著(P=0.000；P=0.000；P=0.001),而p-P27(Thr187)表達量無明顯變化(P=0.070)。在細胞核蛋白中,P27蛋白、P-P27(Ser10)表達量變化顯著(P=0.001；P=0.001),而P-P27(Thr187)、P-P27(Thr157)表達量無明顯變化(P=0.223；P=0.482)

8、。給予處理前后細胞周期變化顯著(P=0.001)。
　　 4、兩細胞系同時經(jīng)LY294002作用后,在細胞總蛋白中P27蛋白、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)的表達無統(tǒng)計學差異(P=0.391；P=0.158；P=0.106),僅p-P27(Thr187)表達差別顯著(P=0.000)。在細胞漿蛋白中,P27蛋白、P-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)的表達無統(tǒng)計學差異(P=0.279；P=0.

9、062；P=0.196),僅p-P27(Thr187)表達差別顯著(P=0.002)。在細胞核蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)的表達無統(tǒng)計學差異(P=0.092:P=0.081；P=0.055),僅p-P27(Thr187)表達差別顯著(P=0.000)。兩組細胞的周期分布無統(tǒng)計學差異(P=0.564)。
　　 結(jié)論:
　　 1、P27蛋白及磷酸化P27蛋白在GES-1細胞系和BG

10、C-823細胞系中的表達水平和核漿分布規(guī)律不同。
　　 2、阻斷PI3K信號通路對GES-1細胞系中P27蛋白及磷酸化P27蛋白的表達水平和核漿分布影響不大,也不會對其細胞周期產(chǎn)生擾亂。
　　 3、阻斷PI3K信號通路可增加BGC-823細胞系中P27蛋白表達量,減低磷酸化P27蛋白的表達量,并可影響細胞周期的分布,使其接近正常細胞。
　　 4、PI3K信號通路主要通過改變P27蛋白的核漿分布,促進其在胞漿定位而