鏈霉菌Men-myco-93-63抗生素的提取純化及生防制劑的研究.pdf

1、鏈霉菌Men-myco-93-63是從馬鈴薯瘡痂病自然衰退土壤中分離出的一種對(duì)多種植物病原菌有抑制作用的生防鏈霉菌.該文的主要目的是對(duì)該菌株產(chǎn)生的抗生素進(jìn)行分離純化,確定其結(jié)構(gòu),建立抗生素中試提取工藝及開(kāi)發(fā)出合理的生物農(nóng)藥劑型.首先采用了以棉花黃萎病菌,馬鈴薯瘡痂病菌為指示菌的平皿篩選模型,對(duì)發(fā)酵液中的活性成分進(jìn)行篩選.發(fā)酵液經(jīng)無(wú)機(jī)沉淀劑預(yù)處理,選用HZ803吸附樹(shù)脂吸附,洗脫液經(jīng)等體積的乙酸乙酯萃取獲得抗生素粗品.對(duì)獲得的抗生素粗品以

2、240 nm為檢測(cè)波長(zhǎng),利用Nova-Pak C18(WATERS)7.8mm× 300mm 6um反相柱,流速:2.0 mL/min,應(yīng)用30％-80%-100%甲醇對(duì)抗生素粗品進(jìn)行梯度洗脫.活性測(cè)定表明所獲得的13個(gè)組分對(duì)馬鈴薯瘡痂病菌均有有抑制作用,其中有7個(gè)組分對(duì)棉花黃萎病菌有抑制作用.在上述分析色譜的基礎(chǔ)之上,應(yīng)用制備液相以240 nm為檢測(cè)波長(zhǎng),流速:15 mL/min,應(yīng)用70%-70%-100%甲醇對(duì)抗生素粗品進(jìn)行分離,

3、得到7個(gè)峰,其中峰Ⅵ經(jīng)光譜圖比較與組分13同質(zhì),同時(shí)對(duì)峰Ⅵ進(jìn)行制備.對(duì)收集的峰Ⅵ,又經(jīng)94%甲醇等度分離收集其中的主峰(6-B).將主峰(6-B)40℃減壓濃縮,冷凍干燥獲得一淡黃色油滴,經(jīng)UV、MS、NMR、IR分析確定其為一分子量為390,分子式為C24H38O4的脂類化合物.另外,建立了該菌株的抗生素中試提取工藝流程,該流程包括以下步驟:1)發(fā)酵液的預(yù)處理和固液分離:0.08%聚丙烯酰胺對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行絮凝預(yù)處理,4000 rpm,離

4、心20 min后過(guò)濾,將濾液pH調(diào)節(jié)到4.2)濃縮提取:發(fā)酵濾液經(jīng)80℃減壓濃縮,經(jīng)甲醇溶解過(guò)濾,去除沉淀.3)粗品獲得:甲醇溶解液中滴加10%乙醇,去除沉淀,濾液40℃減壓濃縮獲得抗生素粗品.并以獲得的抗生素粗品為原藥,制做了兩種生防制劑—乳油和聚醋酸乙烯酯(白乳膠)顆粒劑.乳油制劑經(jīng)室內(nèi)平皿試驗(yàn),證明對(duì)棉花黃萎病表現(xiàn)明顯的抑制作用,其1000倍稀釋液對(duì)蔬菜根結(jié)線蟲(chóng)擁有明顯的殺傷作用,對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的24h后校正死亡率為30.3%.聚醋酸