鏈霉菌Men-myco-93-63抗生素的提取純化及生防制劑的研究.pdf

1、鏈霉菌Men-myco-93-63是從馬鈴薯瘡痂病自然衰退土壤中分離出的一種對多種植物病原菌有抑制作用的生防鏈霉菌.該文的主要目的是對該菌株產生的抗生素進行分離純化,確定其結構,建立抗生素中試提取工藝及開發(fā)出合理的生物農藥劑型.首先采用了以棉花黃萎病菌,馬鈴薯瘡痂病菌為指示菌的平皿篩選模型,對發(fā)酵液中的活性成分進行篩選.發(fā)酵液經無機沉淀劑預處理,選用HZ803吸附樹脂吸附,洗脫液經等體積的乙酸乙酯萃取獲得抗生素粗品.對獲得的抗生素粗品以

2、240 nm為檢測波長,利用Nova-Pak C18(WATERS)7.8mm× 300mm 6um反相柱,流速:2.0 mL/min,應用30％-80%-100%甲醇對抗生素粗品進行梯度洗脫.活性測定表明所獲得的13個組分對馬鈴薯瘡痂病菌均有有抑制作用,其中有7個組分對棉花黃萎病菌有抑制作用.在上述分析色譜的基礎之上,應用制備液相以240 nm為檢測波長,流速:15 mL/min,應用70%-70%-100%甲醇對抗生素粗品進行分離,

3、得到7個峰,其中峰Ⅵ經光譜圖比較與組分13同質,同時對峰Ⅵ進行制備.對收集的峰Ⅵ,又經94%甲醇等度分離收集其中的主峰(6-B).將主峰(6-B)40℃減壓濃縮,冷凍干燥獲得一淡黃色油滴,經UV、MS、NMR、IR分析確定其為一分子量為390,分子式為C24H38O4的脂類化合物.另外,建立了該菌株的抗生素中試提取工藝流程,該流程包括以下步驟:1)發(fā)酵液的預處理和固液分離:0.08%聚丙烯酰胺對發(fā)酵液進行絮凝預處理,4000 rpm,離

4、心20 min后過濾,將濾液pH調節(jié)到4.2)濃縮提取:發(fā)酵濾液經80℃減壓濃縮,經甲醇溶解過濾,去除沉淀.3)粗品獲得:甲醇溶解液中滴加10%乙醇,去除沉淀,濾液40℃減壓濃縮獲得抗生素粗品.并以獲得的抗生素粗品為原藥,制做了兩種生防制劑—乳油和聚醋酸乙烯酯(白乳膠)顆粒劑.乳油制劑經室內平皿試驗,證明對棉花黃萎病表現明顯的抑制作用,其1000倍稀釋液對蔬菜根結線蟲擁有明顯的殺傷作用,對根結線蟲的24h后校正死亡率為30.3%.聚醋酸