拮抗鏈霉菌Men-myco-93-63分類學(xué)鑒定及其幾丁質(zhì)酶基因研究.pdf

1、形態(tài)特征、培養(yǎng)特征及生理生化特征分析發(fā)現(xiàn),棉花黃萎病拮抗鏈霉菌Men-myco-93-63孢子絲呈螺旋形,孢子橢圓形,孢子表面結(jié)構(gòu)光滑.在九種不同培養(yǎng)基生長(zhǎng)良好,基基生菌絲及氣生菌絲顏色分別為淡黃色和淡白色,在部分培養(yǎng)基上培養(yǎng)可產(chǎn)生象牙黃和豆汁黃可溶性色素.鏈霉菌Men-myco-93-63可在15℃~37℃環(huán)境下生長(zhǎng),環(huán)境溫度為45℃時(shí)生長(zhǎng)停滯.其存活pH值為pH5~pH12;明膠液化;牛奶凝固;淀粉水解強(qiáng),可利用纖維素;不產(chǎn)生H<,

2、2>S和黑色素,不還原硝酸鹽;利用葡萄糖、麥芽糖、甘油、木糖、果糖、蔗糖、肌醇、阿拉伯糖、鼠李糖,不利用棉子糖、甘露醇、醋酸鈉.鏈霉菌Men-myco-93-63與玫瑰黃鏈霉菌(Streptomyces roseoflavus)的形態(tài)特征及培養(yǎng)特征一致.二者的確良6SrDNA序列相似性達(dá)到了99.93﹪.并且二者的確16SrDNA序列中的確良20bpγ可變區(qū)序列完全相同.以大腸桿菌-鏈霉菌穿梭柯斯質(zhì)粒pKC505為克隆載體,構(gòu)建了玫瑰黃

3、鏈霉菌Men-myco-93-63在大腸桿菌LE392的基因文庫(kù).3168個(gè)轉(zhuǎn)化子構(gòu)成的文庫(kù)覆蓋率達(dá)到了99.93﹪,插入外源DNA片段大小為20~30kb.利用chiC基因片段為探針,從基因文庫(kù)篩選到5個(gè)陽(yáng)性克隆.利用染色體步移法測(cè)定了Streptomyces roseoflavus chiC基因1179bp片段序列該序列包含了典型的第18族幾丁質(zhì)酶基因的活性位點(diǎn)序列(Prosite數(shù)據(jù)庫(kù),編號(hào):PS01095),并且包含了與蛋白質(zhì)結(jié)