玫瑰英鏈霉菌Men-myco-93-63與變鉛青鏈霉菌TK24的原生質(zhì)體種間融合.pdf

1、玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63對多種植物病原真菌和細(xì)菌有較強的抑制作用,溫室和大田試驗表明該菌株的代謝產(chǎn)物對棉花黃萎病和瓜類白粉病有較好的防效作用,其有效成分和作用機理正在研究中。雙親株滅活原生質(zhì)體融合擺脫了遺傳標(biāo)記給育種工作帶來的束縛,使融合子的檢出變得直觀,是值得推廣的一種選育高產(chǎn)菌株的方法。
　　 本文對玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63和變鉛青鏈霉菌TK24的原生質(zhì)體分別進(jìn)行熱滅活和紫外滅活,在PEG40

2、00介導(dǎo)下融合,所得“融合子”以棉花黃萎病菌和馬鈴薯瘡痂病菌為指示菌篩選抗生素高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌種,傳代培養(yǎng)檢測高產(chǎn)“融合子”的穩(wěn)定性,并觀察“融合子”的培養(yǎng)特征和形態(tài)特征:利用基因組酶切和可溶性蛋白質(zhì)電泳驗證融合子與親本的遺傳關(guān)系；通過搖瓶發(fā)酵獲得高產(chǎn)融合菌株抗生素粗品的產(chǎn)量,得出增產(chǎn)率；以融合子RH19為代表,采用親株的發(fā)酵培養(yǎng)基對融合子RH19進(jìn)行搖瓶發(fā)酵實驗,利用薄層色譜(TLC)和高效液相色譜(HPLC)分析融合菌株抗生素粗品。通過玫

3、瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63與變鉛青鏈霉菌TK24原生質(zhì)體的種間融合實驗,得到了十四株對棉花黃萎病菌和馬鈴薯瘡痂病菌具有抑制作用的融合子,融合子RH19抑菌活性明顯強于玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63。經(jīng)過十次傳代發(fā)現(xiàn),融合子的遺傳穩(wěn)定性良好。高產(chǎn)融合子在固體R2YE培養(yǎng)基及液體燕麥培養(yǎng)基上均產(chǎn)生黃綠色色素,并且培養(yǎng)特征和形態(tài)特征明顯不同于親株。對基因組DNA進(jìn)行酶切發(fā)現(xiàn)融合子的酶切片段與親本不同；對“融合子”RH19

4、及親本的可溶性總蛋白進(jìn)行了SDS—PAGE分析,發(fā)現(xiàn)“融合子”RH19的可溶性總蛋白圖譜與雙親有一定的相似性又產(chǎn)生了新的條帶；搖瓶發(fā)酵實驗結(jié)果顯示融合子粗提抗生素的產(chǎn)量為0.18g／L,而玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63為0.07g／L,增產(chǎn)了159％；TLC和HPLC結(jié)果表明此菌株能夠產(chǎn)生親本不能產(chǎn)生的新的次級代謝產(chǎn)物。本研究證實了玫瑰黃鏈霉菌Men-myco-93-63和變鉛青鏈霉菌TK24之間發(fā)生了基因重組。該研究結(jié)果為放