版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:RNA干擾(RNA interference,RNAi)是一種新型有效的基因沉默技術(shù),廣泛地應(yīng)用在腫瘤基因的研究中。許多研究表明,血管內(nèi)皮生長因子受體3(vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3)與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān),但是否與腫瘤的生長增殖直接相關(guān)仍不清楚,本研究的目的在于通過構(gòu)建VEGFR-3 siRNA的表達(dá)載體來了解抑制VEGFR-3的表達(dá)是否可以抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的
2、生長。
方法:根據(jù)RNA干擾設(shè)計(jì)的原則,設(shè)計(jì)3對包含有64bp的干擾片段,此片段有一發(fā)夾結(jié)構(gòu),兩端有和質(zhì)粒相接的粘性末端,和pSUPER載體相連接后雙酶切鑒定,并進(jìn)行測序,構(gòu)建成pSUPER-siRNA/VEGFR-3重組載體,將重組載體轉(zhuǎn)染入結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞系,采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)觀察細(xì)胞的生長曲線,RT-實(shí)時熒光定量PCR檢測重組載體在轉(zhuǎn)染前后VEGFR-3 mRNA表達(dá)水平的變化,蛋白免疫印跡法(Weste
3、rn blot)檢測VEGFR-3的蛋白表達(dá)。通過篩選,將轉(zhuǎn)染高效表達(dá)VEGFR-3 siRNA的載體和空pSUPER載體的LoVo細(xì)胞注射入裸鼠皮下形成結(jié)腸癌腫瘤模型,定期測定腫瘤生長速度,腫瘤標(biāo)本免疫組織化學(xué)了解腫瘤VEGFR-3的表達(dá)。
結(jié)果:經(jīng)酶切鑒定,靶向VEGFR-3的小干擾RNA表達(dá)載體構(gòu)建成功,重組載體出現(xiàn)281bp的小片段,而空載體出現(xiàn)的則為241bp。將構(gòu)建的3條pSUPER-siRNA轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌LoV
4、o細(xì)胞系后,pSUPER-siRNA2/VEGFR-3重組載體可顯著抑制LoVo細(xì)胞中VEGFR-3基因的表達(dá),轉(zhuǎn)染pSUPER-siRNA2/VEGFR-3細(xì)胞生長明顯抑制,Western blot檢測顯示VEGFR-3基因蛋白表達(dá)明顯降低,與陰性對照組相比差異具有顯著性(P<0.05)。將轉(zhuǎn)染陽性質(zhì)粒后的腫瘤細(xì)胞和空載體細(xì)胞建造的裸鼠結(jié)腸癌腫瘤模型,見前者腫瘤增長較后者明顯較慢,腫瘤體積在4周后測定對照組比對照組明顯小((201.4
5、±34.6)mm3 vs(439.6±31.9)mm3))。腫瘤組織VEGFR-3免疫組化染色后發(fā)現(xiàn)前者的淋巴管形成較后者減少((4.8±3.9)mm3 vs(13.6±5.6)mm3)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:重組VEGFR-3 siRNA表達(dá)載體成功構(gòu)建,體外實(shí)驗(yàn)表明其對結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞系血管內(nèi)皮生長受體3形成基因沉默,并抑制胃癌細(xì)胞的增殖。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,重組VEGFR-3 siRNA表達(dá)載體對結(jié)腸癌
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- RNA干擾抑制血管內(nèi)皮生長因子介導(dǎo)結(jié)腸癌基因治療.pdf
- 血管內(nèi)皮生長因子和結(jié)腸癌的相關(guān)性研究.pdf
- RNA干擾抑制腫瘤細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá).pdf
- 槲皮素對胃癌細(xì)胞株MGC-803中血管內(nèi)皮生長因子-C及其受體血管內(nèi)皮生長因子受體-3表達(dá)水平的影響.pdf
- 可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1(sFlt-1)對結(jié)腸癌細(xì)胞生長抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 血管內(nèi)皮生長因子對血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)理研究.pdf
- 環(huán)氧化酶2、血管內(nèi)皮生長因子C-血管內(nèi)皮生長因子受體3與肺癌淋巴轉(zhuǎn)移.pdf
- 消痰散結(jié)方對胃癌血管內(nèi)皮生長因子及其受體表達(dá)的影響.pdf
- 基因血管內(nèi)皮生長因子
- 辛伐他汀對哮喘大鼠氣道炎癥、血管內(nèi)皮生長因子及其受體的影響.pdf
- 血管內(nèi)皮生長因子干擾RNA對鼠視網(wǎng)膜VEGFmRNA的抑制作用.pdf
- 喉癌組織中血管內(nèi)皮生長因子受體3的表達(dá)和血管內(nèi)皮生長因子C與淋巴管形成關(guān)系的研究.pdf
- 血管內(nèi)皮生長因子對血管內(nèi)皮細(xì)胞鎂離子濃度的影響.pdf
- 血管內(nèi)皮生長因子受體KDR的導(dǎo)向制劑的研究.pdf
- 血管內(nèi)皮生長因子及其受體在喉鱗癌中的表達(dá).pdf
- 通過RNA干擾技術(shù)抑制人非小細(xì)胞肺癌血管內(nèi)皮生長因子基因表達(dá)的研究.pdf
- 堿性成纖維生長因子對血管生成素、血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響.pdf
- 血管內(nèi)皮生長因子及其受體在尖銳濕疣中的表達(dá).pdf
- 血管內(nèi)皮生長因子對心肺發(fā)育影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 血管內(nèi)皮生長因子對血管內(nèi)皮細(xì)胞αv整合素表達(dá)的影響.pdf
評論
0/150
提交評論