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文檔簡介
1、目的:利用人體外周血來源的樹突狀細胞(dendriticcells,DCs)強大的抗原提呈能力和激活T細胞尤其是初始型T細胞的能力,用腺樣囊性癌細胞系總RNA轉染DC制成一種治療性疫苗,觀察這種疫苗在裸鼠體內誘導腫瘤患者抗原特異性抗瘤免疫的能力。 方法:采集腺樣囊性癌患者外周單核細胞,用貼壁方法分離單核細胞。貼壁的單核細胞加rhIL-4和rhGM-CSF常規(guī)條件下培養(yǎng)7天獲得未成熟DC,觀察DC形態(tài),流式細胞儀確認DC的表面標志
2、。從腺樣囊性癌細胞系提取總RNA后轉染DC。流式細胞儀測定轉染前后DC的表面標志的變化。轉染后的DC與自體T淋巴細胞混合,誘導T淋巴細胞成為抗原特異性CTL。流式細胞儀分析刺激前后T淋巴細胞成分變化。 建立裸鼠腺樣囊性癌移植瘤模型,以DC激活的CTL預防性接種于裸鼠皮下,觀察隨后接種的腺樣囊性癌細胞系移植瘤發(fā)生率。觀察接種于裸鼠的腺樣囊性癌細胞系移植瘤生長。 結果:提取腺樣囊性癌細胞系總RNA后,電泳顯示完整未降解。光學
3、顯微鏡下單核細胞來源的DC有樹枝狀突起的典型形態(tài)。流式細胞儀分析顯示不加TNF-a培養(yǎng)的DC特征性表面標志均未達到成熟,符合轉染用DC的要求。轉染腺樣囊性癌細胞系總RNA后,DC特征性表面標志CD1a及遞呈相關表面標志CD86表達上調,DC向成熟DC方向發(fā)展,間接說明了RNA在DC中得到了表達。DC刺激自體淋巴細胞5天后,CD8+T細胞比例上升。預防組接種腺樣囊性癌細胞后20天內,9只裸鼠中僅2只有移植瘤發(fā)生,而對照組27只均有移植瘤發(fā)
4、生。接種后37天對照組、治療組腫瘤大小分別為1293±170mm2和669±100mm2(P<0.05)。 結論:腺樣囊性癌細胞系總RNA轉染腺樣囊性癌患者外周單核細胞來源的DC后,可促進DC成熟,并有效刺激T淋巴細胞增殖分化為具有殺傷能力的抗原特異性CTL,這種CTL不僅能預防腺樣囊性癌裸鼠移植瘤的發(fā)生,而且能抑制該移植瘤的發(fā)展。提示腺樣囊性癌細胞總RNA轉染DC在裸鼠實驗中是一種有效的治療性疫苗,可誘導特異性抗瘤免疫殺傷腫瘤
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