幾個轉(zhuǎn)基因棉變異性狀的驗證與T-DNA插入位點分析.pdf

1、在棉花轉(zhuǎn)基因研究中經(jīng)常會出現(xiàn)一些性狀變異的個體，出現(xiàn)變異可能是因為體細胞培養(yǎng)過程中誘變產(chǎn)生，也可能是因為T-DNA插入到基因組中引發(fā)的突變。從中選取多個轉(zhuǎn)基因系，以其中4個與受體品種冀合321（理論上為近等基因系）進行比較分析，比較四個轉(zhuǎn)基因系與其原始受體品種冀合321在農(nóng)藝性狀、品質(zhì)性狀上的差異。以這四個品系與冀合321配制四個組合，在F2分離世代，田間對四個分離群體的各150個單株作卡那霉素抗性鑒定；設(shè)計報告基因NPTⅡ的引物作PC

2、R擴增，確定陰陽性比率；分析F2、F2：3陰陽性組間農(nóng)藝、品質(zhì)性狀間的差異顯著性；同時對多個轉(zhuǎn)基因系作了Southem分析；運用TAIL-PCR（熱不對稱交錯PCR）技術(shù)獲取和分析T-DNA側(cè)翼序列。結(jié)果如下： 1．卡那霉素和PCR檢測4個組合在172分離比率均為3:1；Southem分析4個轉(zhuǎn)基因系為單拷貝插入；其它幾個轉(zhuǎn)基因系拷貝數(shù)分別為1.4個拷貝。HindⅢ酶切轉(zhuǎn)基因棉基因組的效果比較好。 2．調(diào)查了F2、F2：

3、3的品質(zhì)、農(nóng)藝性狀共14個性狀指標。將群體按照PCR擴增陽性和陰性分組，比較了兩組間性狀差異顯著性。其中F2世代A群體的絨長、整齊度差異顯著。F2、F2：3數(shù)據(jù)分析結(jié)果不完全一致，用F2數(shù)據(jù)更適合此處的分析。 3．在T-DNA左邊端設(shè)計了3條巢式引物，右邊端設(shè)計了4條巢式引物，選擇10條隨機簡并引物與之做TAIL-PCR擴增，有兩條簡并引物的效率較高，比較適合于本研究中的棉花基因組。第一輪擴增在整個擴增程序中至關(guān)重要。