人精子產(chǎn)生的免疫球蛋白G及其相關(guān)功能研究.pdf

1、背景和目的：
　　近年來，不少研究揭示除了經(jīng)典途徑免疫細(xì)胞（包括B淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞）能產(chǎn)生免疫球蛋白G（IgG）外，腫瘤細(xì)胞、睪丸的生精細(xì)胞和胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞等也能夠自身產(chǎn)生IgG。這些由其它非經(jīng)典免疫細(xì)胞產(chǎn)生的IgG（特別是非對(duì)稱IgG）已經(jīng)被早期多個(gè)科研團(tuán)隊(duì)證實(shí)可能與腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸機(jī)制及胎兒免受母體異體排斥有關(guān)。本課題組前期研究已經(jīng)證實(shí)，正常人的精子細(xì)胞能夠產(chǎn)生并分泌出IgG。而正常人精子細(xì)胞所產(chǎn)生IgG的功能，目前并不清楚

2、。
　　本研究（1）通過從正常人精子中提取細(xì)胞總蛋白，過重組蛋白 G層析柱，分離并提純得到人精子細(xì)胞的IgG；（2）通過間接 ELISA法，證明正常人精子所產(chǎn)生的IgG中含有非對(duì)稱性IgG，并計(jì)算出其在精子總IgG中所占比例為22.71％；（3）應(yīng)用免疫蛋白印跡法，揭示正常人精子IgG能夠與不同組織來源（如胎盤，腫瘤，正常人血漿）的對(duì)稱性和非對(duì)稱性IgG相互作用；（4）通過免疫組織化學(xué)或者免疫細(xì)胞化學(xué)法，顯示正常人精子IgG能夠與

3、人外周血中提取的中性粒細(xì)胞相互作用。
　　材料與方法：
　　1研究對(duì)象標(biāo)本來源于汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系的在讀的健康的男性大學(xué)生、研究生和汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院生殖中心精子標(biāo)本檢測(cè)正常的男性患者。標(biāo)本量305例，平均年齡35歲。（采樣獲汕大醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)）
　　2細(xì)胞或組織里面IgG的提取按重組蛋白G Agarose試劑盒的操作步驟將胎盤組織細(xì)胞，腫瘤組織細(xì)胞，和精子細(xì)胞中所含的IgG進(jìn)行提取。
　

4、　3對(duì)稱性IgG和非對(duì)稱性IgG的分離按Con A Sepharose?4B試劑盒的操作步驟，將胎盤組織細(xì)胞，腫瘤組織細(xì)胞中提取的免疫球蛋白G分為對(duì)稱性的IgG和非對(duì)稱性的IgG。
　　4生物素微量蛋白標(biāo)記按AnaTag? Biotin微量蛋白標(biāo)記盒的操作步驟將已分離好的精子總IgG、胎盤細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞來源的對(duì)稱性或非對(duì)稱性IgG標(biāo)記上生物素，以用作免疫蛋白印跡或者免疫組化中的一抗。
　　5酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)精子I

5、gG濃度按檢測(cè)人IgG的免疫過氧化物酶法試劑盒步驟，測(cè)出精子總IgG的濃度，用一定量的精子總蛋白過Con A4 B層析柱，再測(cè)出分離收集到的對(duì)稱性IgG的濃度，從而可間接算出精子非對(duì)稱IgG在總IgG中所占的比例。
　　6銀染法（Sliver staining）檢測(cè)從組織和精子中提取出的IgG純度。
　　7免疫印跡法(Western blot, WB)探究與精子所產(chǎn)生的IgG相互作用的蛋白質(zhì)類型。
　　8免疫組織化學(xué)法