重組腺相關(guān)病毒介導(dǎo)klotho基因轉(zhuǎn)導(dǎo)對2型糖尿病大鼠腎臟肥大及纖維化的作用和機(jī)制.pdf

1、目的:觀察重組腺相關(guān)病毒(rAAV)介導(dǎo)的克老素(KL)基因表達(dá)對2型糖尿病(T2DM)大鼠腎臟肥大及纖維化的影響及機(jī)制。
　　 方法:采用高脂飲食STZ誘導(dǎo)2型糖尿病SD大鼠模型，用腺相關(guān)病毒構(gòu)建重組小鼠全長klotho(mKL) cDNA(rAAV.mKL)及GFP空質(zhì)粒報(bào)告基因(rAAV.GFP)，將雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組，隨機(jī)選3組建立T2DM大鼠模型，分別經(jīng)尾靜脈注射rAAV.mKL(T2DM-mKL組)、rAAV.

2、GFP（T2DM-GFP組）和PBS(T2DM-PBS組)，正常對照組SD大鼠注射PBS(SD-PBS組)，實(shí)驗(yàn)12周后處死動(dòng)物，收集血液及組織標(biāo)本。腎臟冰凍切片檢測GFP蛋白表達(dá)，稱取雙側(cè)腎重及體重計(jì)算腎肥大指數(shù)(KHI)，PAS染色、Masson染色觀察腎臟肥大、膠原纖維表達(dá)及病理變化，RT-PCR檢測腎臟mKL、ROCKI基因表達(dá)情況，ELISA檢測血清KL蛋白表達(dá)量，免疫組化分析腎臟KL蛋白、纖連蛋白(FN)及波形蛋白(VIM)

3、表達(dá)情況，Western blot檢測ROCKI蛋白活性。
　　 結(jié)果:(1) T2DM-mKL組和T2DM-GFP組大鼠腎臟均有強(qiáng)烈GFP熒光蛋白表達(dá);(2)與T2DM-PBS組相比，T2DM-mKL組大鼠腎臟有小鼠KL基因特異性表達(dá)，且血清及腎臟KL蛋白表達(dá)顯著增加;(3) T2DM-PBS組腎肥大指數(shù)顯著高于T2DM-mKL組;(4)T2DM-mKL組腎臟腎小球體積及總腎小球細(xì)胞數(shù)較T2DM-PBS組顯著減少;(5) T2

4、DM-mKL組腎臟系膜區(qū)及腎小管間質(zhì)區(qū)膠原纖維表達(dá)較T2DM-PBS組顯著降低;(6)T2DM-mKL組腎臟病理改變較T2DM-PBS組明顯減輕;(7)T2DM-mKL組腎臟FN及VIM蛋白表達(dá)較T2DM-PBS組顯著減少;(8)與T2DM-PBS組相比，T2DM-mKL組ROCKI基因表達(dá)及蛋白活性明顯降低。
　　 結(jié)論:rAAV.mKL轉(zhuǎn)染可顯著增加T2DM大鼠腎臟KL基因的表達(dá)，且KL基因表達(dá)上調(diào)能延緩糖尿病腎肥大及纖維化