犬新孢子蟲(chóng)吉林株NcSRS2基因片段的原核表達(dá)及初步應(yīng)用.pdf

1、新孢子蟲(chóng)病(Neosporiasis)是由犬新孢子蟲(chóng)(Neospora caninum)寄生于犬、牛、馬、羊等多種宿主動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)而引起的一種原蟲(chóng)病。該病對(duì)牛的危害尤為嚴(yán)重，主要造成孕畜流產(chǎn)、死胎以及新生犢牛的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)系統(tǒng)疾病,已給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。國(guó)外學(xué)者在新孢子蟲(chóng)的致密顆粒棒狀體內(nèi)以及速殖子表面發(fā)現(xiàn)了新孢子蟲(chóng)表面蛋白NcSRS2,NcSRS2表面蛋白介導(dǎo)其粘附及入侵宿主細(xì)胞，可以作為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)有效的抗原成分，是最有

2、希望的新孢子蟲(chóng)疫苗的侯選抗原。
　　本研究利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和克隆了1100bp犬新孢子蟲(chóng)吉林株NcSRS2基因片段，對(duì)所克隆的NcSRS2基因序列與基因庫(kù)中已發(fā)表的序列（AY940488）進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明同源性達(dá)到99.8％，證明了該基因片段為犬新孢子蟲(chóng)NcSRS2基因。將NcSRS2基因亞克隆至原核表達(dá)載體pGEX-4T-2，經(jīng)PCR鑒定及酶切鑒定，證明成功構(gòu)建了融合表達(dá)載體pGEX-NcSRS2。將構(gòu)建好的融合表達(dá)載體

3、，在1mmol/L的IPTG誘導(dǎo)下，在大腸桿菌BL21中得到大量表達(dá)，經(jīng)過(guò)8 h表達(dá)量達(dá)到高峰。融合蛋白 GST-NcSRS2的分子量為64.4 ku，大部分以可溶性蛋白的形式存在。用親和層析方法對(duì)GST-NcSRS2融合蛋白進(jìn)行了純化，獲得了理想的純化結(jié)果。經(jīng)Western blotting免疫印跡分析，融合蛋白與犬新孢子蟲(chóng)陽(yáng)性血清發(fā)生特異性反應(yīng)，而同剛地弓形蟲(chóng)陽(yáng)性血清沒(méi)有交叉反應(yīng)，說(shuō)明該蛋白具有很好的抗原性和特異性。
　　本研