抗肝衰復方對重型肝炎患者肝臟合成功能的影響及機制的實驗研究.pdf

1、背景：我國乙型肝炎病毒(HBV)感染率約占人口 10％-12％，其中約1％-2％會導致急性肝衰竭。肝炎病毒引起的急性肝衰竭稱為重型肝炎。由于其征候變化多端，病機錯綜復雜，給臨床辨證論治帶來了諸多困難。我們認為其病因病機的關鍵是“濕熱疫毒”。感受濕熱疫毒，熱毒內蘊，煎灼營血，薰蒸肝膽，肝失疏泄，膽汁排泄不暢而外溢，從而導致重型肝炎。其治則是清熱解毒，利濕攻下。由此建立了抗肝衰復方。 目的：觀察抗肝衰復方對重型肝炎患者肝臟合成功能的

2、影響，并建立急性肝衰竭大鼠模型，觀察抗肝衰復方對急性肝衰竭大鼠肝組織HMGB1和PCNA的影響，從減輕肝損傷和促進肝再生兩方面探討抗肝衰復方對大鼠急性肝衰竭的作用機制。 方法：1.臨床觀察：治療組和對照組患者各 60 名，均為重型肝炎患者；對照組給予常規(guī)西醫(yī)基礎綜合治療，治療組在上述綜合治療基礎上，加用抗肝衰復方口服或灌腸治療，觀察兩組患者的白蛋白(Alb)、凝血酶原活動度(PTA)、膽固醇(T-ch)指標。2.動物實驗：健康雄

3、性wistar大鼠110只，體重180-220克，隨機分為6組：正常組10 只，模型組20只，PHGF組20只，茵陳組20只，抗肝衰復方小、大劑量組分別20只。除正常組外其余各組分別給予 D-GalN 800mg/kg和 LPS0.1mg/kg的劑量，腹腔注射一次成模(已經過預實驗揭示此造模方法成功)，正常組給予等量生理鹽水腹腔注射。各組均于造模后2h用藥，按每次1.5ml/100g，分上下午每天兩次灌胃。PHGF組，按藥物濃度1.28

4、mg/ml灌服 PHGF；茵陳組，按生藥濃度2.4g/ml 灌服中藥；抗肝衰復方小劑量組，按生藥濃度3.75g/ml灌服中藥；抗肝衰復方大劑量組，按生藥濃度7.5g/ml灌服中藥；模型組和正常組均分別按1.5ml/100g灌服生理鹽水，每天2次，連用三天。造模后72h取材。(1)觀察造模后72小時內大鼠病死率，眼球采血，檢測ALT、AST、TBil。(2)取肝組織普通病理切片常規(guī)染色后，光鏡觀察結構變化。(3)取肝組織蛋白印跡法檢測HM

5、GB1蛋白。(4)取肝組織免疫組織化學染色法檢測 PCNA 蛋白。 結果：1.臨床觀察：白蛋白(Alb)、凝血酶原活動度(PTA)、膽固醇(T-ch)指標治療后與治療前相比明顯改善，差異有顯著性意義(P<0.05)，抗肝衰復方組治療后PTA檢測結果與對照組比較，PTA改善明顯，差異有非常顯著性意義(P<0.01)。 2.動物實驗結果：（1）大鼠病死率：造模后，大鼠病死率明顯升高。模型組與正常組比較，差異有非常顯著性意義(P<0.

6、01)，抗肝衰復方大劑量、PHGF組與模型組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。（2）肝功能：模型組大鼠ALT、AST、TBil水平均明顯高于正常組(P<0.01)，PHGF組、茵陳組、抗肝衰復方小、大劑量組上述指標均較模型組低。與模型組比較，PHGF 組、抗肝衰復方大劑量組差異有顯著性意義(P<0.01或P<0.05)，茵陳組、抗肝衰復方小劑量組亦有差異(P<0.05)；抗肝衰復方大小劑量、茵陳組間比較差異無顯著性意義 (P>0.0

7、5)。（3）肝組織病理學改變：模型組大鼠肝細胞見肝小葉結構破壞，肝細胞呈彌漫性壞死，匯管區(qū)炎性細胞浸潤程度較重。與模型組相比，PHGF對照組、茵陳組、抗肝衰復方大、小劑量組肝細胞損傷程度均有改善，而以抗肝衰復方大劑量組改善最明顯。（4）肝組織 HMGB1 表達水平：模型組大鼠 HMGB1 表達水平明顯高于正常組(P<0.01)，PHGF組、茵陳組、抗肝衰復方大、小劑量組上述指標亦高于正常組(P<0.01)。PHGF組、抗肝衰復方大劑量組

8、上述指標較模型組均有所下降的，差異有顯著性意義(P<0.05)。其中，以抗肝衰復方大劑量組下降最明顯。且經直線回歸相關分析顯示，大鼠 HMGB1 表達水平與ALT、AST、TBil均成顯著正相關(P<0.01)，HMGB1 表達水平與各組大鼠肝臟壞死程度成正相關。（5）肝組織PCNA表達水平：正常組大鼠肝組織中，PCNA表達水平最低，PHGF組和模型組相比，差異有非常顯著性意義(P<0.01)。茵陳組、抗肝衰復方大、小劑量組與模型組相比

9、，差異也均有顯著性意義(P<0.01)。茵陳組、抗肝衰復方大、小劑量組的PCNA表達介于模型組和PHGF組之間。且抗肝衰復方大劑量組高于抗肝衰復方小劑量組，抗肝衰復方小劑量組高于茵陳組。 結論：1.抗肝衰復方能明顯改善重型肝炎患者肝臟合成功能。2.晚期炎性細胞因子介導的免疫損傷在大鼠急性肝衰竭中發(fā)揮一定的作用。3.抗肝衰復方對急性肝衰竭大鼠模型有保護作用，其機制可能涉及抗肝衰復方能抑制 HMGB1 的釋放，降低內毒素血癥，從而減