大鼠尾核內一氧化氮在痛覺調制中的作用及其機制的研究.pdf

1、目的： 以鉀離子透入-甩尾法為疼痛模型和大鼠尾核神經元體外培養(yǎng)模型，研究大鼠尾核內一氧化氮在痛覺調制中的作用及可能的作用途徑。 方法： 1．痛閾測定：雄性Wistar大鼠，以鉀離子透入引起大鼠甩尾的電流強度（mA）作為痛反應指標，分別向尾核內微量注射生理鹽水（NS）、L-精氨酸（L-Arg）、D-精氨酸（D-Arg）、N<’ω>-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）和亞甲基藍（MB），觀察注藥后30 min內大鼠痛閾的

2、變化。 2．血漿和尾核cGMP測定：雄性Wistar大鼠，分別向尾核內微量注射NS、L-Arg和MB，在5、10、15、20和30 min斷頭取腦取血，應用放射免疫方法測定血液和尾核中cGMP含量的變化。 3．尾核內nNOS表達的檢測：雄性Wistar大鼠，分為NS組、L-Arg和L-NAME組，以免疫組織化學結合計算機圖像分析的方法，觀察給藥后6、12、24、48和72 h尾核內nNOS表達的變化；應用逆轉錄-聚合酶鏈

3、反應（RT-PCR），觀察給藥后4、8、12、24和48h尾核nNOS mRNA表達的變化。 4．新生Wistar大鼠尾核原代神經元體外培養(yǎng)：培養(yǎng)的神經元生長4 d后分別向培養(yǎng)液中加入NS、L-Arg和L-NAME，觀察給藥12 h后體外培養(yǎng)的尾核神經元nNOS mRNA表達的變化。 結果： 1．微量注射L-Arg后5～10 min大鼠痛閾與NS對照組比顯著降低（p＜0.01），10 min后大鼠痛閾逐漸回升。注

4、射L-NAME后30 min內大鼠痛閾較NS對照組顯著升高（p＜0.05或P＜0.01）注射MB后5～15 min大鼠痛閾較NS對照組升高明顯（P＜0.05或p＜0.01），以后大鼠痛閾逐漸恢復正常。 2．注射L-Arg 5min后大鼠尾核和血漿cGMP含量與NS對照組相比開始升高，直至20min與NS對照組相比cGMP含量顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。此后尾核和血漿cGMP含量逐漸恢復到正常水平。注射MB5min后大

5、鼠尾核和血中cGMP含量與NS對照組相比開始降低，10～15min內與NS對照組相比明顯降低（P＜0.01）。之后尾核和血漿cGMP含量逐漸回升，至20min與對照相比差異仍有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。 3．NOS神經元散在表達，陽性部位主要在胞漿，神經纖維也有表達。L-Arg組nNOS神經元較對照組表達增強（P＜0.05或P＜0.01），且隨著時間的延長而增強，48h達最高點。L-NAME組nNOS神經元表達較

6、對照組減弱（P＜0.05或P＜0.01），隨時間延長繼續(xù)減弱，48h達最低點。 4．大鼠尾核給藥24h內L-Arg組nNOSmRNA表達較正常增強（P＜0.05或P＜0.01），而L-NAME組nNOSmRNA表達較正常減弱（P＜0.05或P＜0.01），48h恢復正常。體外尾核原代神經元培養(yǎng)，nNOSmRNA表達的變化和體內相一致。 結論: 本實驗采用行為學測痛、放射免疫測定、免疫組織化學和RT-PCR等方法提示大鼠尾