大鼠尾核內(nèi)一氧化氮在痛覺(jué)調(diào)制中的作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的： 以鉀離子透入-甩尾法為疼痛模型和大鼠尾核神經(jīng)元體外培養(yǎng)模型，研究大鼠尾核內(nèi)一氧化氮在痛覺(jué)調(diào)制中的作用及可能的作用途徑。 方法： 1．痛閾測(cè)定：雄性Wistar大鼠，以鉀離子透入引起大鼠甩尾的電流強(qiáng)度（mA）作為痛反應(yīng)指標(biāo)，分別向尾核內(nèi)微量注射生理鹽水（NS）、L-精氨酸（L-Arg）、D-精氨酸（D-Arg）、N<’ω>-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）和亞甲基藍(lán)（MB），觀察注藥后30 min內(nèi)大鼠痛閾的

2、變化。 2．血漿和尾核cGMP測(cè)定：雄性Wistar大鼠，分別向尾核內(nèi)微量注射NS、L-Arg和MB，在5、10、15、20和30 min斷頭取腦取血，應(yīng)用放射免疫方法測(cè)定血液和尾核中cGMP含量的變化。 3．尾核內(nèi)nNOS表達(dá)的檢測(cè)：雄性Wistar大鼠，分為NS組、L-Arg和L-NAME組，以免疫組織化學(xué)結(jié)合計(jì)算機(jī)圖像分析的方法，觀察給藥后6、12、24、48和72 h尾核內(nèi)nNOS表達(dá)的變化；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈

3、反應(yīng)（RT-PCR），觀察給藥后4、8、12、24和48h尾核nNOS mRNA表達(dá)的變化。 4．新生Wistar大鼠尾核原代神經(jīng)元體外培養(yǎng)：培養(yǎng)的神經(jīng)元生長(zhǎng)4 d后分別向培養(yǎng)液中加入NS、L-Arg和L-NAME，觀察給藥12 h后體外培養(yǎng)的尾核神經(jīng)元nNOS mRNA表達(dá)的變化。 結(jié)果： 1．微量注射L-Arg后5～10 min大鼠痛閾與NS對(duì)照組比顯著降低（p＜0.01），10 min后大鼠痛閾逐漸回升。注

4、射L-NAME后30 min內(nèi)大鼠痛閾較NS對(duì)照組顯著升高（p＜0.05或P＜0.01）注射MB后5～15 min大鼠痛閾較NS對(duì)照組升高明顯（P＜0.05或p＜0.01），以后大鼠痛閾逐漸恢復(fù)正常。 2．注射L-Arg 5min后大鼠尾核和血漿cGMP含量與NS對(duì)照組相比開(kāi)始升高，直至20min與NS對(duì)照組相比cGMP含量顯著升高（P＜0.05或P＜0.01）。此后尾核和血漿cGMP含量逐漸恢復(fù)到正常水平。注射MB5min后大

5、鼠尾核和血中cGMP含量與NS對(duì)照組相比開(kāi)始降低，10～15min內(nèi)與NS對(duì)照組相比明顯降低（P＜0.01）。之后尾核和血漿cGMP含量逐漸回升，至20min與對(duì)照相比差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。 3．NOS神經(jīng)元散在表達(dá)，陽(yáng)性部位主要在胞漿，神經(jīng)纖維也有表達(dá)。L-Arg組nNOS神經(jīng)元較對(duì)照組表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.05或P＜0.01），且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)，48h達(dá)最高點(diǎn)。L-NAME組nNOS神經(jīng)元表達(dá)較

6、對(duì)照組減弱（P＜0.05或P＜0.01），隨時(shí)間延長(zhǎng)繼續(xù)減弱，48h達(dá)最低點(diǎn)。 4．大鼠尾核給藥24h內(nèi)L-Arg組nNOSmRNA表達(dá)較正常增強(qiáng)（P＜0.05或P＜0.01），而L-NAME組nNOSmRNA表達(dá)較正常減弱（P＜0.05或P＜0.01），48h恢復(fù)正常。體外尾核原代神經(jīng)元培養(yǎng)，nNOSmRNA表達(dá)的變化和體內(nèi)相一致。 結(jié)論: 本實(shí)驗(yàn)采用行為學(xué)測(cè)痛、放射免疫測(cè)定、免疫組織化學(xué)和RT-PCR等方法提示大鼠尾