模擬失重肺組織蛋白組學(xué)變化和藥物干預(yù)對(duì)一氧化氮表達(dá)及凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　 失重會(huì)使肺功能受到影響，并可導(dǎo)致一定程度肺組織損傷。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠尾懸吊模擬失重的方法，研究模擬失重后大鼠肺組織蛋白組學(xué)變化情況，深入了解失重所致肺損傷的發(fā)生機(jī)制；同時(shí)選擇N-乙酰半胱氨酸和銀杏葉提取物進(jìn)行藥物干預(yù)，觀察大鼠肺組織細(xì)胞凋亡和一氧化氮表達(dá)情況的變化，為失重所致肺損傷的藥物防護(hù)提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.蛋白組學(xué)研究：選擇健康雄性S-D大鼠20只，體重180-220g，隨機(jī)分

2、為模擬失重7天和正常對(duì)照2組，采用尾懸吊-30°作為模擬失重模型。尾懸吊結(jié)束時(shí)，用10％水合氯醛(30ml/kg)腹腔注射麻醉后，打開(kāi)胸腔取出肺組織并提取肺組織蛋白，蛋白提取后采用雙向電泳技術(shù)(2-DE)建立差異表達(dá)圖譜，通過(guò)凝膠成像分析和人工比對(duì)，確定差異蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，然后對(duì)每個(gè)差異蛋白點(diǎn)進(jìn)行膠內(nèi)酶切，采用HDMS進(jìn)行液相串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)分析結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)檢索鑒定蛋白質(zhì)。最后對(duì)差異蛋白的生物學(xué)功能進(jìn)行較為詳細(xì)的了解和分類(lèi)，進(jìn)一步

3、深入研究它們的功能。
　　 2.藥物干預(yù)研究：選擇健康雄性S—D大鼠40只，體重180-220g，隨機(jī)分為模擬失重7天、正常對(duì)照、N-乙酰半胱氨酸干預(yù)和銀杏葉提取物干預(yù)4組，采用尾懸吊-30°作為模擬失重模型。尾懸吊結(jié)束時(shí)，用10％水合氯醛(30ml/kg)腹腔注射麻醉后，打開(kāi)胸腔取出肺組織制作石蠟切片。采用原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)法、免疫組織化學(xué)法和原位雜交法分別觀察大鼠肺組織細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)和bcl-2、ba

4、x及iNOS mRNA的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.蛋白組學(xué)變化：應(yīng)用2-DE對(duì)懸吊組和對(duì)照組大鼠肺組織樣品進(jìn)行分離和對(duì)比，建立差異表達(dá)圖譜，通過(guò)凝膠成像分析和人工比對(duì)，確定差異蛋白質(zhì)斑點(diǎn)17個(gè)，其中13個(gè)上調(diào)，3個(gè)下調(diào)，1個(gè)消失。這些點(diǎn)分布在等電點(diǎn)4.65-8.61、分子量15972-60317范圍內(nèi)，最大表達(dá)上調(diào)6.9倍，下調(diào)最低至0.1倍。經(jīng)膠內(nèi)酶切和質(zhì)譜鑒定，共鑒定出17種蛋白質(zhì)，其中13種上調(diào)，3種下調(diào)，1

5、種消失，與細(xì)胞代謝相關(guān)的5個(gè)，與細(xì)胞功能相關(guān)的4個(gè)，與細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白相關(guān)的3個(gè)，與蛋白降解系統(tǒng)相關(guān)的2個(gè)，與信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的3個(gè)。它們可能與細(xì)胞能量代謝、應(yīng)激與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞損傷與修復(fù)、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和其它細(xì)胞功能活動(dòng)有關(guān)，在細(xì)胞免疫應(yīng)答、細(xì)胞凋亡等方面起著重要的作用。
　　 2.藥物干預(yù)結(jié)果：懸吊組大鼠肺組織細(xì)胞凋亡指數(shù)(23.1％±2.6％)明顯高于正常對(duì)照組(2.2％±1.1％)(P<0.05)，而N-乙酰半胱氨酸干預(yù)組大鼠肺

6、組織細(xì)胞凋亡指數(shù)(7.5％±1.6％)顯著低于尾懸吊組(P<0.05)，大鼠肺組織bcl-2/baxmRNA的表達(dá)也有相應(yīng)的變化(P<0.05)。懸吊組大鼠肺組織iNOS表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，而N乙酰半胱氨酸干預(yù)組大鼠肺組織iNOS表達(dá)水平明顯低于7天懸吊組(P<0.05)，大鼠肺組織iNOS mRNA表達(dá)也有相應(yīng)的變化(P<0.05)。同樣，銀杏葉提取物干預(yù)組大鼠肺組織細(xì)胞凋亡指數(shù)(8.1％±1.7％)顯著低于尾懸吊

7、組(P<0.05)，其bcl-2/baxmRNA的表達(dá)也有相應(yīng)的變化(P<0.05)。而且銀杏葉提取物干預(yù)組大鼠肺組織iNOS表達(dá)水平也明顯低于7天懸吊組(P<0.05)，其iNOS mRNA表達(dá)也有相應(yīng)的變化(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 模擬失重后大鼠肺組織蛋白組學(xué)發(fā)生變化，有些蛋白表達(dá)上調(diào)，而有些蛋白表達(dá)下調(diào)甚至消失，影響細(xì)胞能量代謝、應(yīng)激與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞損傷與修復(fù)以及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等細(xì)胞功能活動(dòng)，在失重所