丹參對(duì)豚鼠耳蝸缺血再灌注損傷后細(xì)胞凋亡和Fas系統(tǒng)表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)建立豚鼠耳蝸缺血再灌注損傷模型： 1.觀察缺血及再灌注損傷后不同時(shí)間段豚鼠耳蝸的形態(tài)學(xué)改變 2.觀察缺血及再灌注損傷后不同時(shí)間段豚鼠耳蝸Fas蛋白和Fas配體的表達(dá)及分布情況并進(jìn)行圖像分析 3.觀察缺血及再灌注損傷后不同時(shí)間段豚鼠耳蝸細(xì)胞凋亡的情況 4.對(duì)缺血及再灌注損傷后不同時(shí)間段豚鼠耳蝸Fas系統(tǒng)的表達(dá)與細(xì)胞凋亡間的關(guān)系進(jìn)行分析 5.探討丹參對(duì)以上改變的作用 方法：

2、健康豚鼠72只隨機(jī)分成正常組、假手術(shù)組、丹參干預(yù)假手術(shù)組、模型組和干預(yù)組(丹參注射液術(shù)前腹腔注射，每天1次共7天)，后兩組各在缺血30分鐘、再灌注6小時(shí)及再灌注24小時(shí)取材。每組8只。 耳蝸缺血再灌注模型的建立方法：豚鼠麻醉后頸前正中切口依次分離皮下組織、肌肉，暴露雙側(cè)椎動(dòng)脈和一側(cè)頸總動(dòng)脈，灼斷雙側(cè)椎動(dòng)脈并用微動(dòng)脈夾夾閉頸總動(dòng)脈建立耳蝸缺血模型，打開微動(dòng)脈夾使頸總動(dòng)脈血流復(fù)通建立再灌注模型，假手術(shù)組僅暴露血管。取豚鼠耳蝸制作石蠟

3、切片，用組織化學(xué)方法觀察缺血及再灌注不同時(shí)間點(diǎn)耳蝸各部位的組織學(xué)改變，用免疫組織化學(xué)法(SP)觀察Fas系統(tǒng)的表達(dá)和分布，用TUNEL法觀察細(xì)胞凋亡的情況，并與丹參干預(yù)后進(jìn)行比較。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，用LSD檢驗(yàn)比較組間差異，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： HE染色見(jiàn)正常組、假手術(shù)組和丹參干預(yù)假手術(shù)組Corti器毛細(xì)胞無(wú)損傷，血管紋清晰；缺血及再灌注各組可見(jiàn)毛細(xì)胞變形、缺損，螺旋神經(jīng)

4、節(jié)細(xì)胞減少，血管紋變薄，以再灌注24h改變最明顯；丹參干預(yù)組各組改變明顯減輕。免疫組織化學(xué)染色見(jiàn)正常組、假手術(shù)組和丹參干預(yù)假手術(shù)組耳蝸血管紋、螺旋神經(jīng)節(jié)、Corti器Fas和FasL表達(dá)為弱陽(yáng)性，缺血及再灌注各組表達(dá)明顯增強(qiáng)，丹參干預(yù)后表達(dá)減弱。TUNEL法顯示正常組、假手術(shù)組和丹參干預(yù)假手術(shù)組耳蝸各部位沒(méi)有或僅有個(gè)別部位出現(xiàn)細(xì)胞凋亡，缺血及再灌注各組耳蝸凋亡細(xì)胞明顯增多，丹參干預(yù)后凋亡細(xì)胞減少。 結(jié)論： 通過(guò)微動(dòng)脈夾及