八種中國豆類莢果乙醇提取物及所含的楊梅素蕓香苷抗氧化作用研究.pdf

1、流行病學(xué)調(diào)查顯示，飲食結(jié)構(gòu)的合理與否，和腫瘤、心血管疾病、肝病等一系列慢性疾病的發(fā)生率密切相關(guān)。體內(nèi)外大量研究證實，從植物飲食中攝入的黃酮類化合物在預(yù)防、治療上述慢性疾病中發(fā)揮了十分重要的作用。人類栽培和食用豆類莢果已經(jīng)有幾千年的歷史，在世界上許多地區(qū)，豆類及其制品至今具有廣泛的消費群體。許多有關(guān)豆類莢果的研究已廣泛開展，但以前研究主要注重其中的蛋白質(zhì)及膳食纖維對人類的貢獻(xiàn)，而對其他成分的研究相對較少。自大豆中含有的異黃酮經(jīng)廣泛的藥理研

2、究證明具有防動脈粥樣硬化，抗腫瘤，抗骨質(zhì)疏松等多種作用以來，許多豆類中活性成分的分離以及研究已經(jīng)深入開展，特別是其中含有的膳食黃酮類化合物可以作為體內(nèi)天然抗氧化物質(zhì)的來源而備受重視。 中國具有大量的豆類資源，許多為我國所特有，然而尚未見有關(guān)人對其作系統(tǒng)研究的報道。本研究為中國政府與德國政府間的戰(zhàn)略合作“食品營養(yǎng)”領(lǐng)域招標(biāo)課題，利用中國豐富的豆類資源，對綠豆(Vignaradiata(L.)Wilczek)、赤豆(Phaseolu

3、sangularisWight.)、黑大豆(Glycinemax(L.)Merr.)、利馬豆(PhaseoluslunatusL.)、蠶豆(ViciafabaL.)、豌豆(PisumsativumL.)、菜豆(蔓生)(PhaseolusvulgarisL.)、菜豆(矮生)(Phaseolusvulgarisvar.humilisAlief)八種中國日常食用豆類黃酮及其相關(guān)多酚定性定量及活性成分研究，旨在明確其與防治疾病的營養(yǎng)成分及分布情

4、況。 本研究作為項目的一部分，通過抗氧化活性研究，以體外超氧陰離子清除實驗.及對氧化損傷性原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞保護(hù)作用為評價指標(biāo)，籍以尋找中國日常食用豆類莢果中具有較強(qiáng)抗氧化作用的物質(zhì)，并初步闡明其對氧化損傷保護(hù)的作用機(jī)制。以期在此基礎(chǔ)研究上，發(fā)現(xiàn)豆類莢果及其中成分更廣泛的營養(yǎng)學(xué)意義。 1.豆類莢果的提取、成分分離、結(jié)構(gòu)鑒定采用乙醇提取，聚酰胺柱富集，冷凍干燥的方法取得豆類莢果乙醇提取物。紫外掃描、鹽酸/鎂粉反應(yīng)、薄層色譜

5、等初步鑒定以及進(jìn)一步采用制備液相對提取物進(jìn)行分離、純化，并用液質(zhì)聯(lián)用及核磁共振進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，顯示其主要成分為黃酮類化合物。 2.豆類莢果乙醇提取物的抗氧化作用及對氧化損傷性原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞的保護(hù)作用研究采用Photochem抗氧化測定儀對豆類莢果乙醇提取物的體外超氧陰離子清除能力進(jìn)行測定，結(jié)果表明八種提取物均具有程度不同的抗氧化作用，其清除能力按強(qiáng)弱依次為：赤豆＞綠豆＞菜豆(矮生)＞黑大豆＞菜豆(蔓生)＞蠶豆＞豌豆＞利馬豆。M

6、TT法和培養(yǎng)液中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)活性測定結(jié)果顯示，原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞用100μmol/LFe2+處理16小時，和未處理組比較，活性降低為空白組的35﹪，胞外ALT活力升高4倍，并具有顯著性差異(P＜0.05)。用一定濃度的綠豆、赤豆、菜豆(矮生)和菜豆(蔓生)提取物預(yù)處理4小時后，可明顯抑制上述變化(P＜0.05)，并呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。同時，鏡下細(xì)胞形態(tài)觀察顯示，上述提取物能提高24小時的細(xì)胞存活能力。提示豆類莢果乙醇提取

7、物對氧化損傷原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞的保護(hù)作用和其抗氧化作用相關(guān)。 3.豆類莢果分離成分的超氧陰離子清除能力體外測定發(fā)現(xiàn)豆類莢果中所含的黃酮及相關(guān)多酚類化合物都具有程度不同的抗氧化作用。其中赤豆莢果中的楊梅素蕓香苷具有最強(qiáng)的超氧陰離子清除作用，1nmol/L的楊梅素蕓香苷相當(dāng)于5.7nmol/L維生素C的超氧陰離子清除能力。 4.楊梅素蕓香苷對氧化損傷性原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞的保護(hù)作用選用體外抗氧化作用最強(qiáng)的楊梅素蕓香苷對Fe2+

8、介導(dǎo)的氧化損傷性原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)作用研究。與模型組比較，50、100μmol/L楊梅素蕓香苷能顯著提高氧化損傷原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞活性，分別為1.62和2.04倍(P＜0.01)。氧化損傷原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞用楊梅素蕓香苷預(yù)處理后，胞外ALT活力從模型組的47.7±8.8U/L降低到30.7±3.0U/L(20μmol/L)和23.7±3.7U/L(100μmol/L)(P＜0.05)。50μmol/L楊梅素蕓香苷預(yù)處理后，和模型

9、組比較，原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物-丙二醛含量降低了44﹪(P＜0.05)。 5.楊梅素蕓香苷對氧化損傷性原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活力及mRNA表達(dá)的影響50、100μmol/L楊梅素蕓香苷預(yù)處理100μmol/LFe2+損傷原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞4小時后，和模型組比較，細(xì)胞中SOD活力分別升高了1.56和1.57倍(P＜0.05)。GSH-Px活力在20、50、100μ

10、mol/L濃度下分別升高了1.64、1.63、2.36倍(P＜0.05)。表明楊梅素蕓香苷可以提高氧化損傷原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞中抗氧化酶SOD和GSH-Px活力。 原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞用Fe2+處理16小時后，SODmRNA為空白對照組表達(dá)量的49﹪，GSH-PxmRNA為63﹪。經(jīng)10、50、100μmol/L楊梅素蕓香苷預(yù)處理4小時后，SODmRNA表達(dá)量分別提高到空白組的60﹪，75﹪和118﹪，GSH-PxmRNA表達(dá)量分別

11、提高到106﹪，93﹪和114﹪。100μmol/L濃度組和模型組比較，SODmRNA表達(dá)升高2.4倍。GSH-PxmRNA表達(dá)升高1.8倍。提示楊梅素蕓香苷提高氧化損傷原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞中SOD和GSH-Px活力和其上調(diào)mRNA表達(dá)有關(guān)。 結(jié)論1.八種豆類莢果乙醇提取物中主要成分為黃酮和多酚類化合物，其中赤豆提取物中含有的楊梅素蕓香苷未見相關(guān)報道。 2.八種豆類莢果乙醇提取物均具有不同程度的抗氧化作用，按體外自由基清除

12、能力強(qiáng)弱依次為：赤豆＞綠豆＞菜豆(矮生)＞黑大豆＞菜豆(蔓生)＞蠶豆＞豌豆＞利馬豆。 3.赤豆、綠豆、菜豆(矮生)和菜豆(蔓生)等乙醇提取物對Fe2+介導(dǎo)的氧化損傷性原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用。比較豆類莢果乙醇提取物的體外抗氧化作用和細(xì)胞保護(hù)作用發(fā)現(xiàn)，兩者呈現(xiàn)相關(guān)性。 4.體外測定發(fā)現(xiàn)豆類莢果中所含的黃酮及相關(guān)多酚類化合物都具有程度不同的抗氧化作用。其中赤豆莢果中的楊梅素蕓香苷具有最強(qiáng)的超氧陰離子清除作用。