玫瑰孢鏈霉菌產(chǎn)達(dá)托霉素發(fā)酵工藝研究.pdf

1、本論文采用單因素法、正交試驗(yàn)法以及響應(yīng)面法對達(dá)托霉素發(fā)酵條件及發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，同時(shí)考察了補(bǔ)加葡萄糖以及氨基酸對達(dá)托霉素發(fā)酵的影響，結(jié)果如下:
　　 建立了測定發(fā)酵液中達(dá)托霉素含量的反相HPLC方法，色譜分析條件為:HypersilODS2（4.6mm×250mm，5μm）;流動(dòng)相為含0.1％三氟乙酸的乙腈/含0.1％三氟乙酸的超純水(45/55，V/V);流速為1.0 ml/min;進(jìn)樣量為20μl;檢測波長為220 nm

2、。
　　 以玫瑰孢鏈霉菌H11為達(dá)托霉素生產(chǎn)菌，通過搖瓶單因素試驗(yàn)法對達(dá)托霉素發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，確定了最佳發(fā)酵條件為:接種齡42 h，接種量2％，裝液量25 ml，溫度28℃，初始pH7.5。通過正交試驗(yàn)法優(yōu)化了達(dá)托霉素發(fā)酵培養(yǎng)基，在此優(yōu)化的培養(yǎng)基及條件下，達(dá)托霉素的產(chǎn)量提高了107.99％。
　　 利用PB設(shè)計(jì)、最陡爬坡實(shí)驗(yàn)、CCD實(shí)驗(yàn)相結(jié)合的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對影響達(dá)托霉素發(fā)酵的培養(yǎng)基組分及主要外在條件進(jìn)行了進(jìn)一步的優(yōu)化和

3、評(píng)價(jià)，確定了達(dá)托霉素?fù)u瓶最佳發(fā)酵條件，達(dá)托霉素產(chǎn)量的預(yù)測值為184.67 mg/L。發(fā)酵驗(yàn)證試驗(yàn)測得達(dá)托霉素的產(chǎn)量為191.99mg/L，與優(yōu)化前相比達(dá)托霉素產(chǎn)量提高了2.25倍，表明此方法對于優(yōu)化達(dá)托霉素發(fā)酵條件是一種可行、有效的方法。
　　 在搖瓶及2.5 L發(fā)酵罐中研究了補(bǔ)加葡萄糖對達(dá)托霉素發(fā)酵的影響。搖瓶發(fā)酵結(jié)果表明:初始葡萄糖為40 g/L時(shí)最佳;在對數(shù)生長期后期補(bǔ)加20 g/L的葡萄糖，達(dá)托霉素產(chǎn)量提高了39.77％

4、;在對數(shù)生長期和穩(wěn)定期分4次共補(bǔ)加20 g/L的葡萄糖，達(dá)托霉素產(chǎn)量提高了62.06％。2.5 L發(fā)酵罐補(bǔ)料分批發(fā)酵結(jié)果表明，從發(fā)酵12h開始共流加30g/L葡萄糖，不僅有效地延長了抗生素的合成期，而且提高了菌體合成抗生素的能力，最終使達(dá)托霉素的產(chǎn)量比分批發(fā)酵提高了1.39倍。
　　 研究了補(bǔ)加氨基酸對達(dá)托霉素發(fā)酵的影響，結(jié)果表明:L-Trp及L-Asp具有前體的作用，能夠刺激達(dá)托霉素的合成;在發(fā)酵初期添加1g/L的L-Trp使