藥物與蛋白質(zhì)的相互結(jié)合作用研究及應(yīng)用.pdf

1、蛋白質(zhì)是生命系統(tǒng)中的基本物質(zhì)，在生物的生命活動中起著極其重要的作用。任何藥物進入生物體都需要蛋白質(zhì)的運輸，因此研究藥物與蛋白質(zhì)的相互作用機理，建立測定蛋白質(zhì)的高靈敏度、低檢測限、簡單方便的測定方法具有現(xiàn)實意義，也是當前生物分析化學(xué)研究的熱點之一。
　　 本文利用分子熒光法、分光光度法、1H核磁共振波譜法、傅里葉變換紅外光譜法等研究了十二種藥物與蛋白質(zhì)的相互作用機理。建立了以葉綠酸-a甲酯銅與葉綠素銅鈉為共振瑞利散射探針測定人血清

2、白蛋白含量的新方法，結(jié)果令人滿意。本文主要分為四個部分：
　　 第一部分：綜述了研究蛋白質(zhì)與藥物相互作用的研究機理和方法；論述了共振瑞利散射法定量測定蛋白質(zhì)的方法和進展。
　　 第二部分：利用分子熒光法、分光光度法研究了25℃和37℃時五種喜樹堿類藥物：鹽酸拓撲替康(TH)，鹽酸依利替康(IH)，7-乙基喜樹堿(ECPT)，10-羥基喜樹堿(HCPT)7乙基-10羥基喜樹堿(EHCPT)與轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)的相互作用機理，

3、實驗表明：五種喜樹堿類藥物對轉(zhuǎn)鐵蛋白的熒光光譜均有猝滅作用，且都為單一的靜態(tài)猝滅過程。
　　 25℃時結(jié)合反應(yīng)的平衡常數(shù)K0(L·mol-1)和結(jié)合常數(shù)KB(L·mol-1)分別為K0(TH)=5.78×105，K0(IH)=4.82×104，K0(ECPT)=9.37×103，K0(HCPT)=4.01×106，K0(EHCPT)=1.027×103；KB(TH)=1.66×104，KB(IH)=7.35×104，KB(ECP

4、T)=4.22×104，KB(HCPT)=1.72×104，KB(EHCPT)=3.34×104。根據(jù)F(o)rster非輻射能量轉(zhuǎn)移機理，求算了給體(Tf)與受體(喜樹堿類藥物)間的最短作用距離r分別為：r(TH)=3.77nm，r(IH)=3.78nm，r(ECPT)=3.62nm，r(HCPT)=3.92nm，r(EHCPT)=3.42nm。通過計算反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)表明：鹽酸拓撲替康與Tf結(jié)合主要作用力為氫鍵和范德華力；10-羥基

5、喜樹堿與Tf結(jié)合主要作用力為靜電作用；鹽酸依利替康，7-乙基喜樹堿，7-乙基-10-羥基喜樹堿與Tf結(jié)合主要作用力為疏水作用。利用1H核磁共振波譜法研究了EHCPT與轉(zhuǎn)鐵蛋白作用前后的核磁共振波譜，結(jié)果表明：EHCPT與Tf相互作用時，EHCPT進入Tf的疏水腔體中，10-OH和20-OH與Tf疏水腔體內(nèi)表面的氨基酸殘基發(fā)生相互作用，羥基發(fā)生了去質(zhì)子化反應(yīng)。
　　 第三部分研究了四種磺胺類藥物(磺胺嘧啶：SD，磺胺甲基嘧啶：SM

6、1，磺胺二甲基嘧啶：SM2，磺胺甲基異噁唑：SMZ)及磺胺增效劑(甲氧芐胺嘧啶：TMP)與牛血清白蛋白(BSA)在25℃，30℃，37℃時的熒光猝滅作用。實驗表明：25℃時平衡常數(shù)K0(L·mol-1)為：K0(SM2)=2.31×105，K0(SM1)=6.92×104，K0(SMZ)=8.16×103，K0(TMP)=4.92×102，K0(SD)=3.32×105。結(jié)合點位數(shù)n分別為：n(SM2)=1.1758，n(SM1)=1.

7、0332，n(SMZ)=1.0331，n(TMP)=0.7461，n(SD)=1.2457。結(jié)合常數(shù)KB(L·mol-1)為：KB(SM2)=2.38×104，KB(SM1)=3.21×104，KB(SMZ)=3.96×103，KB(TMP)=3.67×104，KB(SD)=3.07×104。藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合距離r(nm)分別為：r(SM2)=1.85，r(SM1)=2.80，r(SMZ)=2.59，r(TMP)=2.67，r(SD)

8、=2.99。通過實驗反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)變化，表明其結(jié)合作用力類型分別為：磺胺甲基嘧啶，磺胺二甲基嘧啶，磺胺甲基異惡唑，磺胺嘧啶與BSA結(jié)合過程的主要作用力為氫鍵和范德華力。甲氧卞胺嘧啶與BSA結(jié)合過程的主要作用力為靜電作用力。同時，我們用傅里葉變換紅外光譜研究了BSA與SM1和SM2反應(yīng)前后的光譜變化，實驗表明：加入SM1、SM2后牛血清白蛋白的二級結(jié)構(gòu)均發(fā)生了變化。
　　 第四部分：研究了兩種卟啉類化合物作為共振光散射探針測定人

9、血清白蛋白含量的新方法。實驗表明：葉綠素銅鈉為共振散射探針的人血清白蛋白定量分析方法的檢出限為：0.067mg/L，樣品加標回收率為95.6[％]～102.3[％]。測定實際樣品的人血清白蛋白含量為64.82g/L，RSD為1.78[％]，同一樣品用流動注射-抑制化學(xué)發(fā)光法與考馬斯亮藍法進行了比對測定取得滿意結(jié)果。利用葉綠酸-a甲酯銅為散射瑞利探針，方法檢出限為0.0104g/L，加標回收率為99.14[％]～103.12[％]，測定實