葡萄果實(shí)中脫落酸激活的鈣依賴蛋白激酶：純化、測(cè)序及定位.pdf_第1頁(yè)
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1、本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用膠內(nèi)蛋白激酶自磷酸化分析表明，在葡萄果實(shí)微粒體中存在一種分子量約為62.5KD的鈣依賴的蛋白激酶(CDPK)，并且，外源ABA處理能激活這一蛋白激酶。由于CDPK和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)，是一種重要的信號(hào)分子，因此我們將實(shí)驗(yàn)的重點(diǎn)放在了這個(gè)蛋白激酶的純化上?！　≈苽淦咸压麑?shí)微粒體，經(jīng)過(guò)大量的SDS-PAGE電泳，將目的蛋白從膠上洗下來(lái)，低壓冷凍干燥、富集，得到了電泳純的目的蛋白。應(yīng)用雙向電泳(two-dimensionalgelele

2、ctrophoresis)鑒定純化產(chǎn)物的純度，結(jié)果表明純化產(chǎn)物中存在著分子量相近，但等電點(diǎn)不同的兩種蛋白；接著分別用葡萄果實(shí)中CDPK(VCPK1)的全長(zhǎng)和N-端特異抗體與雙向電泳分離后的蛋白發(fā)生免疫反應(yīng)，對(duì)純化產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定，準(zhǔn)確地將目的蛋白從純化產(chǎn)物中鑒定并分離出來(lái)。應(yīng)用串連質(zhì)譜儀(LC-MS/MS)測(cè)定目的蛋白CDPK的蛋白酶解的氨基酸序列，得到了MAPDKPLDSAVLSR；VIAEGLSEEEIGGLR；LTAHEVLS

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