13496.6羥基8氯辛酸乙酯的非水相酶促拆分

1、分類號：UDC：密級：華東理工大學(xué)學(xué)位論文6一羥基一8一氯辛酸乙酯的非水相酶促拆分周偉佳指導(dǎo)教師姓名：許建和教授，鄭高偉助理研究員申請學(xué)位級別：論文定稿日期：學(xué)位授予單位：華東理工大學(xué)生物反應(yīng)器國家重點實驗室碩士專業(yè)名稱：微生物學(xué)2013521論文答辯日期：華東理工大學(xué)學(xué)位授予日期：：：踅13生墨旦21基答辯委員會主席：牟伯中教授評閱人：張井巖教授徐毅副教授華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文第1頁6羥基8氯辛酸乙酯的非水相酶促拆分摘要0【硫辛酸是

2、廣泛存在于動植物體內(nèi)的強抗氧化劑，已經(jīng)在醫(yī)藥、生物食品、營養(yǎng)品、化妝品等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。由于(研0【硫辛酸幾乎不具有抗氧化活力，因此獲得光學(xué)純的僻)0【硫辛酸受到廣泛關(guān)注。目前生物合成方法主要有酯酶催化水解拆分和不對稱生物還原等途徑。本課題通過非水介質(zhì)系統(tǒng)中的酶促乙?；磻?yīng)動力學(xué)拆分混旋6羥基8氯辛酸乙酯獲取俾)對映體，以期與其主要工業(yè)合成途徑(己二酸途徑)相耦合，從而最終合成具有高抗氧化活性的右旋體伍)0【硫辛酸。本課題針對目標(biāo)底物6羥

3、基8氯辛酸乙酯篩選了對其具有較高活性和選擇性的商品脂肪酶Novozym435，測定了其動力學(xué)參數(shù)和反應(yīng)活化能，并分別從?；瘎囟?、反應(yīng)介質(zhì)、水活度、底物耐受性和催化劑上載量等方面系統(tǒng)地優(yōu)化了該酶促乙酰化反應(yīng)的各項參數(shù)。在優(yōu)化條件下，反應(yīng)6h后底物轉(zhuǎn)化率達到47％，產(chǎn)物對映體過量值(ee)為90％，時空產(chǎn)率為471gL_1d1。但是發(fā)現(xiàn)反應(yīng)中Novozym435失活明顯，無法實現(xiàn)重復(fù)批次式操作。研究Novozym435失活的因素發(fā)現(xiàn)：溫

4、度、酰化劑和底物對固定化酶Novozym435的穩(wěn)定性影響較大。在重新優(yōu)化了部分反應(yīng)條件后，Novozym435的穩(wěn)定性得到了顯著提高，在10批次重復(fù)操作反應(yīng)中保持了較好的催化活力和選擇性，控制每一批次的轉(zhuǎn)化率在40％，產(chǎn)物對映體過量值維持在92～96％。在優(yōu)化條件下，對該反應(yīng)產(chǎn)物進行了克級制備：反應(yīng)35h后，轉(zhuǎn)化率達到42％，eeD為94％，時空產(chǎn)率為38gL1d1；通過柱層析分離，共獲得僻)6乙酰氧基8氯辛酸乙酯489g，產(chǎn)率為35