18837.粗糙脈孢菌唑類藥耐藥基因cdr4及ads1的鑒定及機(jī)理分析

1、中國科學(xué)院研究生院碩士學(xué)位論文粗糙脈孢菌唑類藥耐藥基因cdr4及ads1的鑒定及機(jī)理分析姓名：張瑜申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：李少杰201205摘要性測試實驗，從中篩選到一個轉(zhuǎn)錄岡子編碼基因的敲除菌株，在加有酮康唑的藥物平板上，該菌株具有比野生菌株更加敏感的表型。又利用氟康唑和伊曲康唑?qū)υ撉贸赀M(jìn)行藥物敏感性測試實驗，結(jié)果表明該敲除菌株對這些藥物的敏感性也高于野生型。而在高溫(40。C)、高滲透壓力(1MNaCl)和高氧

2、化壓力(18Itg／mlmenadione)條件下，該敲除菌株并沒有表現(xiàn)出比野生型菌株更加敏感的表型。因此，我們將該轉(zhuǎn)錄因子的編碼基岡命名為ads—Jr(antifungaldrugsensitive—J『)。ads—J回補(bǔ)菌株對酮康唑、氟康唑和伊曲康唑的敏感性回復(fù)到了野生菌株的水!F，進(jìn)一步證明ADS一1參與粗糙脈孢菌對唑類藥物的耐藥調(diào)控作用。ADS，1的同源蛋白在絲狀真菌中普遍存在，串珠鐮刀菌(Fusariumveticilliod

3、es)中的ADS一1同源蛋白FvADS一1編碼基因的敲除，也增加了該菌對酮康唑的敏感性，說明該蛋白功能相對保守。為分析ADS一1對耐藥性的調(diào)控機(jī)制，我們分別對酮康唑處理前后的野生菌株和ads—J『敲除菌株的RNA樣品進(jìn)行了DGE測序分析，DGE結(jié)果顯示2058個基因在酮康唑的灣導(dǎo)下增加或減少了轉(zhuǎn)錄，其t1ads一』的轉(zhuǎn)錄水平增加了68倍。根據(jù)RNA樣品的DGE測序結(jié)果，ADS—l參與調(diào)控酮康唑脅迫下1160個基因的轉(zhuǎn)錄變化，其中cdr4