10463.亞硒酸化β乳球蛋白誘導(dǎo)k562細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究

1、分類號：R7301密級：不保密學(xué)校代碼：10057研究生學(xué)號：12808021亞硒酸化13乳球蛋白誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究MechanismStudyofSelenePLactoglobulinonApoptosisEffectinK562Cells專業(yè)名稱：食品科學(xué)指導(dǎo)教師姓名：劉安軍教授研究生姓名：索佳麗申請學(xué)位級別：工學(xué)碩士論文提交日期：2014年12月論文課題來源：國家自然基金學(xué)位授予單位：天津科技大學(xué)摘要本文以亞硒酸化

2、B乳球蛋白為研究對象對其體外抗腫瘤活性進(jìn)行測定，在與K562細(xì)胞共培養(yǎng)后，研究其對K562細(xì)胞增殖的抑制作用和誘導(dǎo)凋亡作用。通過MTT法、HE染色、流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光法和熒光定量PCR等方法從細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化、細(xì)胞周期的變化和相關(guān)周期蛋白及其mRNA的表達(dá)等方面考察了亞硒酸化p乳球蛋白對K562細(xì)胞的影響。首先，對亞硒酸化B乳球蛋白誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的現(xiàn)象進(jìn)行研究。MTT實驗結(jié)果表明，隨著濃度和培養(yǎng)時間的升高，亞硒酸化B乳球蛋白對K

3、562細(xì)胞的抑制作用逐漸變強(qiáng)，100I上g／mL藥物作用K562細(xì)胞48h后，抑制率達(dá)到90％，而正常小鼠成纖維細(xì)胞C2C12在經(jīng)過相同處理后仍然正常生長；HE染色和PI／Hoechst雙染均觀察到亞硒酸化D哥L球蛋白使K562細(xì)胞出現(xiàn)體積縮小、核質(zhì)分離、出現(xiàn)凋亡小體等典型的凋亡現(xiàn)象；AnnexinVFITC／PI雙染結(jié)果表明，經(jīng)過48h與亞硒酸化D一乳球蛋白共培養(yǎng)的K562細(xì)胞的凋亡率為1875％，而共培養(yǎng)72h后凋亡率上升為4076

4、％；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明亞硒酸化p乳球蛋白能夠使細(xì)胞Gl期和G2期發(fā)生顯著變化，細(xì)胞分別被阻滯于S_G2期和G2_M期。其次，研究了亞硒酸化D乳球蛋白誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的信號途徑。免疫熒光實驗和ELISA法共同確定了經(jīng)過亞硒酸化B一乳球蛋白處理的K562細(xì)胞，其cyclinBl蛋白含量顯著降低，p21蛋白含量顯著上升；亞硒酸化D乳球蛋白還使K562細(xì)胞的cyclinBlmRNA水平下調(diào)，極顯著上調(diào)p21mRNA水平，是對照組的2l倍，并