β-乳球蛋白的制備及其亞硒酸化物的結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)旨在研究一種有機(jī)硒源，以β-乳球蛋白和二氧化硒為原料，在真空低溫條件下合成亞硒酸化β-乳球蛋白，研究在這一反應(yīng)下蛋白結(jié)構(gòu)的變化。利用傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)、圓二色譜(CD)、X-射線衍射(X-ray)、核磁共振波譜(NMR)、飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)、雙向電泳(2D-PAGE)、差示掃描量熱(DSC)等技術(shù)研究亞硒酸化β-乳球蛋白的結(jié)構(gòu)變化。
　　首先，對從牛奶中分離純化β-乳球蛋白的方法硫酸銨分級(jí)

2、沉淀、葡聚糖凝膠SephadexG-50柱層析、超濾等進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，飽和度為40％-70％的硫酸銨沉淀可以得到含量最多的β-乳球蛋白;SephadexG-50柱層析的最佳條件為:上樣濃度20mg/mL，上樣量2mL，流速4s/滴;超濾的最適條件為:壓力0.25Mpa，超濾時(shí)間50min。利用凱氏定氮法、雙向電泳技術(shù)對β-乳球蛋白的純度進(jìn)行測定，其蛋白含量達(dá)到92.5％。
　　其次，在真空低溫條件下合成亞硒酸化β-乳球蛋白，

3、合成條件為壓力-0.1Mpa，反應(yīng)時(shí)間5h，反應(yīng)溫度40℃，反應(yīng)體系pH值為3。最終得到硒含量為15.17 mg/g的亞硒酸化β-乳球蛋白。通過FT-IR檢測發(fā)現(xiàn)與β-乳球蛋白相比，亞硒酸化β-乳球蛋白在878cm-1和1043cm-1處新增較強(qiáng)譜帶，分別歸屬于Se=O和Se-O。
　　最后，研究了亞硒酸化β-乳球蛋白結(jié)構(gòu)的變化。CD色譜結(jié)果顯示，與β-乳球蛋白相比，亞硒酸化β-乳球蛋白的α-螺旋比例增加9％，β-折疊的比例減少了

4、14.2％，β-轉(zhuǎn)角減少了6％，無規(guī)則卷曲增加了11.2％，二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生了很大改變。X-ray結(jié)果再次證明了蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。DSC結(jié)果顯示，亞硒酸化β-乳球蛋白的熱穩(wěn)定性降低。NMR分析結(jié)果證明三級(jí)結(jié)構(gòu)也發(fā)生了改變。2D-PAGE顯示，亞硒酸化β-乳球蛋白含有兩種蛋白，且分子量呈兩倍關(guān)系，MALDI-TOF-MS進(jìn)一步分析表明，這兩種蛋白的一維肽指紋圖譜高度一致，得出亞硒酸在與β-乳球蛋白反應(yīng)時(shí)，一些亞硒酸只與一個(gè)β-乳球蛋白相