水稻條紋病毒NS2基因的分子變異及其原核表達(dá).pdf

1、水稻條紋病毒(Rice stripe virus,RSV)引起的水稻條紋葉枯病是水稻上的一種重要病毒病,該病在中國(guó)的分布極為廣泛.為了豐富水稻條紋病毒的分子群體遺傳學(xué),該研究對(duì)采自江蘇、河南、云南、山東、福建等病害發(fā)生區(qū)的24個(gè)分離物RSV RNA2片段上的NS2基因的分子變異情況進(jìn)行了分析.24個(gè)分離物的病葉總RNA經(jīng)特異引物RT-PCR擴(kuò)增后均獲得600bp左右的條帶.將PCR產(chǎn)物進(jìn)行單鏈構(gòu)象多態(tài)性(single-strand co

2、nformationpolymorphism,SSCP)電泳分析,結(jié)果表明,不同分離物的NS2基因條帶基本都呈現(xiàn)出差異.為了準(zhǔn)確分析各分離物NS2基因間的變異情況,對(duì)這24個(gè)分離物進(jìn)行了序列測(cè)定.對(duì)采自同一地區(qū)、不同年份的分離物的序列進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)云南省的分離物在年度間表現(xiàn)出相對(duì)較大的差異.相應(yīng)地,對(duì)采自同一年份、不同地區(qū)的分離物也進(jìn)行了序列分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),2002年的14個(gè)分離物NS2基因分子變異較大,其核苷酸序列的同源性為93.5％

3、-99.7％,氨基酸序列的同源性為93.5％-100％,而2003年的10個(gè)分離物的分子變異較小,其核苷酸與氨基酸序列同源性均大于97.0％.這可能與分離物不同地理來(lái)源有關(guān).該研究構(gòu)建了含RSVNS2基因的融合蛋白原核表達(dá)載體,并在大腸桿菌(E.coli DH5α)中成功地進(jìn)行了表達(dá),為今后研究RSV NS2蛋白在病毒生命周期中的作用奠定基礎(chǔ).SDS-PAGE分析表明表達(dá)的融合蛋白GST-NS2相對(duì)分子量約為49,000.Western