19758.基因插入氯代酪氨酸及其改造綠色熒光蛋白及肌紅蛋白_第1頁
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1、分類號UDC密級編號中國科學院生物物理研究所博士后研究工作報告Geneticincorporationofchlorotyrosineforengineeringoffluorescentproteinandmyoglobin張維指導老師王江云研究員工作完成日期2Q!Q生2旦：2Q12生三旦中國科學院生物物理研究所(北京)2012年3月ABSTRACTRecently，ageneralmethodwasdevelopedthatmake

2、sitpossibletogeneticallyencodeunnaturalaminoacidswithdiversephysical，chemical，orbiologicalpropertiesinEscherichiacoli，yeast，andmammaliancellsMorethan50unnaturalaminoacidshavebeenincorporatedintoproteinswithhighfidelityan

3、defficiencybymeansofauniquecodonandcorrespondingtRNA／aminoacyltRNAsynthetasepairBythemethodintroducingarchaea’StyrosinetRNA／synthetaseasorthogonalpairintoEcoli，Wecanincorporate3chlorotyrosineintothespecificpositionofanyp

4、roteinsPosttranslationalchlorinationoftyrosineresiduesinproteinsproduce3chlorotyrosine(3一C1Tyr)，whichisassociatedwithseveraldiseases，includingAlzheimer’Sdisease，asthma，atherosclerosisandacutemyocardialinfarctionHighlevel

5、of3chlorotyrosinehasbeenfoundinApoA1proteininatherosclerosispatients，indicatingthatitmayplayimportantroleindiseaseComparedtotyrosine(Yyr)，3C1TyrhaslowerpKaWereplacedthegreenfluorescentprotein(GFP)andphotoactivatableprote

6、inmEOS2chromophoreTyr(Tyr66inGFPlby3C1一TyrloweringthechromophorepKato42and47，respectivelyThe64Hisor93HisofMyoglobinwasmutatedwith3一CI—TyrTyrand35一DiCI—TyrThe64Hismutatedproteinswascompetedbindingwithimidazole，anddenature

7、dbyureaTheresultshowedthatMyoglobin64ClTyrwasmorestable，andresistanttobindingofimidazoleBytheexperimentofHemincompetitionbinding，MB64C1一TyrhaveastrongerabilityofbindingHeminthanMB64YMB64ClTyrmayhavestrongerabilityoftrans

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