磨盤柿生物技術(shù)的研究－－組培快繁、不定芽再生及ACC合成酶基因克隆.pdf

1、該論文以磨盤柿當(dāng)年生休眠芽為外植體,研究了接種形態(tài)及基本培養(yǎng)基對(duì)初代培養(yǎng)的影響;以組培苗為材料,研究了影響其離體快繁的諸因素,確定了適于磨盤柿早期和中期繼代增殖的培養(yǎng)基成分;利用組培苗葉片及無(wú)節(jié)莖段為外植體,較為系統(tǒng)地研究了影響其不定芽再生的各因素,建立了不定芽再生體系;從成熟期的磨盤柿果實(shí)中成功克隆了2個(gè)ACC合成酶基因片段.以期為通過(guò)生物技術(shù)改善柿果貯運(yùn)性能、簡(jiǎn)化貯運(yùn)操作奠定基礎(chǔ).主要結(jié)果如下:通過(guò)三因素三水平正交試驗(yàn),對(duì)基本培養(yǎng)基

2、、ZT及IAA對(duì)葉片不定芽再生的影響進(jìn)行了研究.結(jié)果表明,ZT濃度對(duì)葉片不定芽再生的影響作用最大,基本培養(yǎng)基次之,IAA對(duì)愈傷組織的形成有促進(jìn)作用.組培苗頂端前2節(jié)位展開(kāi)葉片,切成4 mm×4 mm左右,遠(yuǎn)軸面接觸培養(yǎng)基時(shí)的再生效果最好.切片在MS(1/2N)+ZT 4.0 mg/L培養(yǎng)基中的分化率和平均不定芽數(shù)分別為76.76％和1.26.位于組培苗頂端前2節(jié)位的伸長(zhǎng)無(wú)節(jié)莖段,切成約4 mm左右,平鋪于MS(1/2N)+ZT 4.0

3、mg/L+IAA 0.1 mg/L培養(yǎng)基中可以獲得最高的分化率和平均不定芽數(shù),分別為83.65%和2.25.ZT和基本培養(yǎng)基對(duì)分化率和平均不定芽數(shù)的影響顯著高于IAA,而IAA對(duì)愈傷組織形成的作用明顯高于ZT和基本培養(yǎng)基.從成熟期的磨盤柿果實(shí)中克隆到2個(gè)ACC合成酶基因片段M-ACS1和M-ACS2,兩者核苷酸與氨基酸的同源性分別為98%和99%;與DK-ACS1的核苷酸同源性分別為69%和70%.二者均編碼224個(gè)氨基酸,均含有其它植