22197.自組裝elps木聚糖酶聚集體的設(shè)計(jì),制備及特性研究

1、學(xué)校代碼：10385分類號(hào)：（可不填）研究生學(xué)號(hào)：1200215017密級(jí)：（楷體五號(hào)）自組裝自組裝ELPsELPs木聚糖酶聚集體的設(shè)計(jì)木聚糖酶聚集體的設(shè)計(jì)制備及特性研究制備及特性研究ThedesignpreparationacteristicofselfassembledELPsxylanaseaggregates作者姓名：沈婷婷沈婷婷指導(dǎo)教師：張光亞張光亞教授教授學(xué)科：生物化學(xué)與分子生物學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向：酶學(xué)與酶工程酶

2、學(xué)與酶工程所在學(xué)院：化工學(xué)院化工學(xué)院論文提交日期：二零一五年四月十日摘要I摘要本課題鑒于之前的實(shí)驗(yàn)，即以類彈性蛋白多肽ELPs（ELP[KV8F20]）為純化標(biāo)簽，通過(guò)可逆熱循環(huán)（Inversethermalcycling，ITC）純化ELPs木聚糖酶的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)很大一部分ELPs木聚糖酶融合蛋白形成不溶性聚集體，相變過(guò)程出現(xiàn)不可逆。同時(shí)該聚集體具有很高的木聚糖酶活力，類似于將木聚糖酶固定化在已發(fā)生相變的ELPs聚集體上。該現(xiàn)象為本課題

3、組首次報(bào)導(dǎo)，其形成機(jī)制尚未得到考察，由此本課題將從多個(gè)角度對(duì)該現(xiàn)象產(chǎn)生的機(jī)制進(jìn)行排查。首先，構(gòu)建帶有木聚糖酶與不同ELPs融合蛋白基因片斷的克隆載體及表達(dá)載體。進(jìn)而表達(dá)純化得到不同長(zhǎng)度ELPs與木聚糖酶的融合蛋白，考察其酶學(xué)性質(zhì)，結(jié)果表明各融合蛋白木聚糖酶的最適溫度均在70℃左右，同未連接ELPs的自由木聚糖酶相比，提高了20℃左右，有助于拓寬木聚糖酶在工業(yè)高溫條件下的應(yīng)用。在木聚糖酶末端連接與之大小相當(dāng)或大于的ELPs，能提高在低溫條

4、件下的酶活，減少在高溫條件下酶活的損失。融合蛋白的最適反應(yīng)pH均為7.0，較短的ELPs能使木聚糖酶較適應(yīng)堿性條件，相反較長(zhǎng)的ELPs能使木聚糖酶較適應(yīng)酸性條件。融合ELPs后的木聚糖酶在堿性條件下保有更多的酶活，改變其對(duì)于酸性環(huán)境有一定的耐受性，而在偏堿的環(huán)境中，酶活力受到抑制的現(xiàn)象。連接較長(zhǎng)的ELPs有助于進(jìn)一步提高酶的重復(fù)利用性。總而言之將木聚糖酶固定在ELPs有助于提高酶的穩(wěn)定性。其次，為探究木聚糖酶ELPs不溶性聚集體的成因，