穿梭質(zhì)粒pSP189-哺乳動(dòng)物Vero細(xì)胞誘變檢測(cè)系統(tǒng)的研究及應(yīng)用.pdf

1、該研究將基于SV40病毒的短暫復(fù)制型穿梭質(zhì)粒pSP189與非洲綠猴腎Vero細(xì)胞組成穿梭質(zhì)粒/哺乳動(dòng)物細(xì)胞誘變檢測(cè)系統(tǒng),并將該系統(tǒng)應(yīng)用于獸藥喹乙醇和喹烯酮的誘變性檢測(cè).該研究經(jīng)陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將pSP189質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞后,回收質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主菌,獲得每皿多于50個(gè)的轉(zhuǎn)化子和1.9×10<'-4>的自發(fā)突變頻率,試驗(yàn)結(jié)果表明該系統(tǒng)符合穿梭質(zhì)粒誘變測(cè)試系統(tǒng)的要求.該研究用已知的直接陽(yáng)性誘變物MNNG和間接陽(yáng)性誘變物B(α)P分別對(duì)已建

2、立的系統(tǒng)進(jìn)行了驗(yàn)證,試驗(yàn)結(jié)果表明,MNNG以0.32μg·ml<'-1>的劑量誘發(fā)的突變頻率較溶劑對(duì)照組高10.5倍,而B(niǎo)(α)P以1.1μg·ml<'-1>的劑量誘發(fā)突變頻率較溶劑對(duì)照組高12倍,上述試驗(yàn)結(jié)果表明,已建立的系統(tǒng)檢測(cè)已知陽(yáng)性誘變物結(jié)果明顯,該系統(tǒng)可用于誘變檢測(cè).質(zhì)粒經(jīng)6.6μg·m1<'-1>的喹乙醇處理后,轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞,并從細(xì)胞中回收質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coliMBM7070,試驗(yàn)結(jié)果表明,喹乙醇處理組的突變頻率明顯高于溶

3、劑對(duì)照組.該研究又對(duì)突變子質(zhì)粒靶基因進(jìn)行序列測(cè)定,發(fā)現(xiàn)喹乙醇引起質(zhì)粒靶基因核苷酸序列改變主要表現(xiàn)為點(diǎn)突變和連續(xù)缺失,且以引發(fā)點(diǎn)突變?yōu)橹?質(zhì)粒經(jīng)1.90、3.75、7.5、15、30μg·ml<'-1>的喹烯酮處理后,將其轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞,回收并轉(zhuǎn)化E.coli MBM7070,試驗(yàn)結(jié)果表明,喹烯酮處理組的突變子數(shù)較溶劑對(duì)照沒(méi)有明顯的增加;試驗(yàn)又采用S<,9>將相同濃度的喹烯酮代謝活化后處理質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞,經(jīng)回收并轉(zhuǎn)化E.coli