25423.天藍(lán)色鏈霉菌sigt的多效調(diào)控作用及其機(jī)制研究

1、浙江大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得逝塑太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：殤緞殤簽字日期：卯幻年仁月7羅日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解逝塹太堂有權(quán)保留

2、并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)逝塹太堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū))學(xué)位論文作者簽名：烤弘％導(dǎo)師簽名：鋤磊葛弘乏簽字日期：力f。年肛月fr7日簽字日期：L爭(zhēng)／哞，2一月2汨浙江大學(xué)博上學(xué)位論文【鍵入文字】摘要摘要illllllIllllIlllUUIIlY1854900

3、天藍(lán)色鏈霉菌(Streptomycescoelicolor)是一種典型的土壤細(xì)菌，在生長(zhǎng)和生理代謝中常受到環(huán)境脅迫作用，長(zhǎng)期進(jìn)化形成了一套完整的脅迫調(diào)控機(jī)制。在這些脅迫調(diào)控機(jī)制中ECFo因子扮演了重要的角色，ECFo因子指調(diào)控胞外功能(如脅迫應(yīng)答、細(xì)胞壁代謝等)的0因子。本文主要研究對(duì)象是ECFo因子Si礦(SC03892)。本文研究了抗oT因子黜認(rèn)缺失條件下SigT的蛋白降解途徑，驗(yàn)證了R姒對(duì)于SigT蛋白穩(wěn)定性的重要意義；分析TSi

4、gT在脅迫條件下對(duì)天藍(lán)色鏈霉菌抗生素生物合成的調(diào)控作用，為完整闡述營(yíng)養(yǎng)脅迫條件下鏈霉菌次級(jí)代謝的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)提供了理論基礎(chǔ)?？埂Ｒ蜃邮桥c。因子結(jié)合的蛋白，具有拮抗。因子活性的特性，但Si酊的抗。因子RstA在表型上并不表現(xiàn)為拮抗作用，本研究發(fā)現(xiàn)s轡乃P呂矽基因?qū)rstA缺失株后，Westernblot沒(méi)有檢測(cè)到船所缺失株qbSigT蛋白的表達(dá)，從而推$0rstA缺失株SigT可能受到了蛋白水平的降解。已知鏈霉菌中蛋白降解的途徑主要有Clp

5、蛋白酶降解途徑，而蛋白被Clp蛋白酶降解往往發(fā)生在SsrA(tmRNA)在蛋白C末端加上蛋白水解酶識(shí)別標(biāo)簽之后，SsrA和Clp蛋白酶降解途徑密切聯(lián)系在一起。我們?cè)趓stA缺失株里敲除TssrA和dpP這二個(gè)和蛋白降解相關(guān)的關(guān)鍵基因，將sigTegfp基因?qū)肓硕€(gè)雙缺失株(AssrAArstA，AclppArstA)后，用Westernblot檢測(cè)這二個(gè)雙缺失株qbSigT的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)這些菌株中SigT蛋白能夠被檢測(cè)到，而對(duì)照Ars

6、tA中的SigT不能被檢測(cè)到，初步i正nYJSigT通過(guò)SsrAClpP途徑被降解，驗(yàn)證了抗。因子RstA對(duì)于SigT穩(wěn)定性的重要作用，這種抗。因子調(diào)控。因子的蛋白降解的機(jī)制類(lèi)似于氧化還原脅迫反應(yīng)相關(guān)[約SigR以及其抗。因子RsrA。本文分析Tsig礞縱子的轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)，證實(shí)TrstB和sig堤共轉(zhuǎn)錄的，而sigT下游的rstA是單獨(dú)轉(zhuǎn)錄的，5’RACE實(shí)驗(yàn)揭示TsigT和rstB共有的二個(gè)啟動(dòng)子都位于rstB基因上游，而rstA基因有三