天藍(lán)色鏈霉菌膜蛋白復(fù)合物及部分脂蛋白功能的研究.pdf

1、細(xì)胞膜是原核生物細(xì)胞的重要組成結(jié)構(gòu)，其功能主要涉及能量轉(zhuǎn)換、物質(zhì)運(yùn)輸以及信息識(shí)別與傳遞等。了解細(xì)胞膜的功能與機(jī)制，特別是物質(zhì)的跨膜運(yùn)輸，具有重要的實(shí)踐意義。
　　我們分別采用BNE、hrCNE等一維電泳、以及native/native、native/SDS-PAGE等二維電泳方法對(duì)天藍(lán)色鏈霉菌的膜蛋白質(zhì)組進(jìn)行了分析研究。核酸干擾是影響 native電泳的主要因素，為了除去膜組分中核酸成分，在加入DDM抽提膜蛋白之后，我們采用了多種

2、方法去除核酸，結(jié)果表明，超速離心是一種有效地去除核酸方法，native電泳性能有了明顯提高。我們對(duì)BNE、hrCNE-DDM和hrCNE-Triton等三種電泳的最佳上樣量進(jìn)行了比較研究；結(jié)果表明，三種電泳的最適上樣量均為80-100μg。
　　通過(guò)二級(jí)質(zhì)譜分析，我們鑒定了77個(gè)蛋白質(zhì)；其中，61個(gè)蛋白質(zhì)來(lái)自hrCNE-Triton/SDS-PAGE二維凝膠，48個(gè)蛋白質(zhì)來(lái)自hrCNE-DDM/SDS-PAGE二維凝膠，其余來(lái)自h

3、rCNE/hrCNE二維凝膠。根據(jù)這些蛋白質(zhì)的生理功能以及聚合狀態(tài)，我們對(duì)這些蛋白質(zhì)進(jìn)行了分類，其中，20個(gè)蛋白質(zhì)分別歸屬于15個(gè)蛋白復(fù)合物，包括完整的ATP合酶，細(xì)胞色素aa3氧化酶核心酶，Tri1六聚體，GlnA同聚體以及BFR同聚體等。另外，我們鑒定了多個(gè)與跨膜運(yùn)輸相關(guān)的蛋白，包括BldKB（SCO5113）、OBP（SCO5477）以及ABP（SCO2008）等；BldKB和OBP與寡肽的運(yùn)輸有關(guān)，而ABP與氨基酸的運(yùn)輸有關(guān)。O

4、BP和BldKB是膜組分中含量最豐富的兩個(gè)蛋白質(zhì)，它們是OppA家族的成員，而OppA家族在胞外多肽降解、信號(hào)傳導(dǎo)等方面具有重要作用。BldKB可能存在三種聚合狀態(tài)，分別是單體，二聚體以及四聚體；OBP也可能存在三種聚合狀態(tài)，分別是單體，二聚體以及四聚體；這種多聚體狀態(tài)很可能是它們轉(zhuǎn)運(yùn)胞外復(fù)雜多肽的一種適應(yīng)方式。
　　天藍(lán)色鏈霉菌編碼223個(gè)脂蛋白，其中40％脂蛋白是溶質(zhì)結(jié)合蛋白，它們與碳水化合物、氨基酸、多肽、核苷以及鐵離子運(yùn)輸

5、等密切相關(guān)，我們發(fā)現(xiàn)并鑒定17個(gè)溶質(zhì)結(jié)合蛋白。脂蛋白SCO4884和SCO4885具有PBP1_BmpA_PnrA_like保守區(qū)域，可能與核苷運(yùn)輸有關(guān)。我們首先在大腸桿菌BL21中過(guò)量表達(dá)了脂蛋白SCO4884和SCO4885；根據(jù)hrCNE電泳、分子篩以及粒度測(cè)定結(jié)果，我們確認(rèn)SCO4884和SCO4885在溶液中均以單體存在。利用等溫滴定量熱法，我們發(fā)現(xiàn) SCO4884、SCO4885與腺苷、脫氧腺苷、胞苷、脫氧胞苷以及尿苷等具有

6、親和特性，而與鳥苷、脫氧鳥苷以及胸苷等不具有親和特性。
　　放線紫紅素是一種II型聚酮化合物，其碳鏈合成由聚酮合酶核心酶（PKS）催化。已有研究表明，參與 II型聚酮化合物合成的各個(gè)酶之間存在相互作用，而且這些酶類可能分布在細(xì)胞的不同部位，比如，SCO5074存在于細(xì)胞壁，SCO5076、SCO5083以及SCO5084存在于細(xì)胞膜，而核心酶SCO5087和SCO5088可能也存在于細(xì)胞膜，組成ActKSαβ膜復(fù)合物。利用載體pS