天藍色鏈霉菌M145中部分含TTA密碼子基因的中斷及功能初探.pdf

1、TTA密碼子是高G＋C細菌天藍色鏈霉菌基因組中最稀有的密碼子，對應(yīng)的亮氨酸密碼UUA只能依靠bldA編碼的tRNA（Leu）UUA識別并翻譯。對大部分天藍色鏈霉菌菌株而言，bldA基因和含TTA密碼子基因是營養(yǎng)生長的非必需基因。在構(gòu)建天藍色鏈霉菌M145基因缺失突變體的過程中，發(fā)現(xiàn)該菌株的bldA只有在加入一個額外拷貝時才能被置換，證明bldA是M145營養(yǎng)生長的必需基因，并且基因組中至少存在一個含有TTA密碼子的必需基因。本研究主要是

2、為了鑒定含有TTA密碼子的必需基因。 選擇了SCD69.13，2SCG1.17，SC10.27，SCK7.13c，SC1C3.22和SCD95A.34c作為目標基因，這些基因大部分在阿維鏈霉菌中存在同源基因。利用這些基因所在的科斯質(zhì)粒和PCR-targeting技術(shù)分別構(gòu)建了基因中斷載體pHL502，pHL503，pHL505，pHL506，pHL507和pHL518，將這些基因中斷載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌ET12567去甲基化后通過接

3、合轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)入M145，篩選到對應(yīng)ORF的基因缺失突變體WJ11，WJ12，WJ13，WJ14，WJ15和WJ17，它們在MS培養(yǎng)基和R5培養(yǎng)基上的表型與野生型M145的表型沒有明顯差異。說明這些基因都不是必需基因，也不是bldA調(diào)節(jié)形態(tài)分化和次生代謝的靶基因。 當SClC3.21的3’端42個堿基和SClC3.22的5’端740個堿基用阿泊拉霉素抗性基因盒置換后，得到的基因置換菌株WJ1表現(xiàn)為產(chǎn)孢產(chǎn)素推遲并減少，該現(xiàn)象能夠被重復。