26314.5氨基乙酰丙酸產(chǎn)生菌的選育及其合成酶基因的克隆與表達(dá)

1、河北科技大學(xué)碩士學(xué)位論文5氨基乙酰丙酸產(chǎn)生菌的選育及其合成酶基因的克隆與表達(dá)姓名：朱文華申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化工指導(dǎo)教師：馮惠勇20100526河北科技大學(xué)碩士學(xué)位論文II本研究根據(jù)GenBank上公布的5氨基乙酰丙酸合成酶hemA基因序列，設(shè)計(jì)引物ALA1和ALA2，并用菌株G污泥Ⅱ的基因組DNA作為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得hemA基因片段，并進(jìn)行TA克隆，構(gòu)建了克隆載體hemAPEASYT1，并對其質(zhì)粒進(jìn)行EcI和Hind

2、III雙酶切驗(yàn)證，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證，得到了一條1230kb的片段，通過序列分析，將結(jié)果與NC_007493USARhodobactersphaeroides進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)G污泥Ⅱ菌株編碼ALA合成酶的基因，有一個(gè)堿基的差異，同源性為99.92%。將基因序列翻譯為氨基酸序列進(jìn)行比對，同樣有一個(gè)堿基的差異，一致性為99％。構(gòu)建了原核表達(dá)載體PET30a–hemA，經(jīng)誘導(dǎo)，該基因能夠在E.coliBL21（DE3）中進(jìn)行高效表達(dá)，經(jīng)SDS