26768.人微小rna轉(zhuǎn)錄組分析及細(xì)胞定位研究

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文人微小RNA轉(zhuǎn)錄組分析及細(xì)胞定位研究姓名：廖建友申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：屈良鵠20100608廖建友中山大學(xué)博十學(xué)位論文2010進(jìn)入細(xì)胞核中。對(duì)各種miRNA在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)水平分析發(fā)現(xiàn)不同miRNA在58F細(xì)胞的細(xì)胞核中的富集程度不同。以前的研究發(fā)現(xiàn)miR29b的3’末端六核苷酸“AGUGUU“是一個(gè)入核信號(hào)，能介導(dǎo)miR29b在細(xì)胞核中的富集。與此發(fā)現(xiàn)相一致的是，本研究也發(fā)現(xiàn)

2、miR29b在細(xì)胞核內(nèi)富集，本研究同時(shí)還發(fā)現(xiàn)有一些miRNA有著和miR29b相似的核富集程度。盡管如此，這些核富集miRNA間并沒有一個(gè)保守的3’末端序列。為了尋找更多的入核信號(hào)，本研究進(jìn)一步分析了所有miRNA3’末端序列和miRNA富集程度間的聯(lián)系，分析結(jié)果顯示它們之間沒有明顯聯(lián)系，這說明miRNA間并沒有一個(gè)保守的入核信號(hào)能介導(dǎo)它們?cè)诩?xì)胞核中的富集。對(duì)人58F細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)微小RNA轉(zhuǎn)錄組的分析還發(fā)現(xiàn)大量的tRNA3’尾巴被從細(xì)

3、胞核運(yùn)到了細(xì)胞質(zhì)并在細(xì)胞質(zhì)中積累。此外，本研究在正常人類細(xì)胞中和其它物種的細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)各種tRNA3’尾巴的積累，這說明tRNA3’尾巴在細(xì)胞中的積累是一個(gè)保守的現(xiàn)象。tRNA3’尾巴是tRNA在加工成熟過程中產(chǎn)生的一個(gè)加工副產(chǎn)物，它在產(chǎn)生后一度被認(rèn)為會(huì)在細(xì)胞核中被降解掉。本研究的發(fā)現(xiàn)說明tRNA3’尾巴可能不是一種無功能的加工副產(chǎn)物，而是一種功能性微小RNA。本研究還利用細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)小RNA的大規(guī)模測(cè)序數(shù)據(jù)來預(yù)測(cè)新的miRNA基因，

4、最終本研究預(yù)測(cè)出了26個(gè)可信度較高的miRNA基因，其中包括一個(gè)保守的miRNA和一個(gè)mirtron。本研究鑒定了一個(gè)由線粒體輕鏈復(fù)制起始位點(diǎn)編碼的微小RNA，該微小RNA具有與tRNAL型三維結(jié)構(gòu)中由T1lrC環(huán)和接收臂堆疊而成的結(jié)構(gòu)域(tIⅢA小螺旋結(jié)構(gòu)域)一樣的結(jié)構(gòu)特征，即能它形成一個(gè)莖長(zhǎng)為12個(gè)堿基對(duì)的發(fā)卡結(jié)構(gòu)，具有鑒別堿基，它的3’末端含有轉(zhuǎn)錄后加上的CCA。已有許多研究表明與tRNA小螺旋結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)一樣的人工合成的RNA小螺

5、旋(稱為tRNA小螺旋)在體外具有許多tRNA的性質(zhì)，比如能被氨?；?。同樣，實(shí)驗(yàn)證明本研究發(fā)現(xiàn)的這個(gè)線粒體輕鏈復(fù)制起始位點(diǎn)編碼的微小RNA也能被氨?；Ｒ虼?，tplsRNA是目前為止發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)內(nèi)源性tRNA小螺旋。由于許多研究認(rèn)為現(xiàn)代tRNA的祖先的結(jié)構(gòu)可能跟tRNA小螺旋結(jié)構(gòu)域一樣，因此本研究將該微小RNA命名為類似tRNA祖先的微小RNA(tRNAprogenitorlikesmallRNAtplsRNA)。關(guān)鍵詞：微小RNA，細(xì)