27979.甲狀腺激素受體新亞型trβδ的dna結(jié)合能力研究

1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文甲狀腺激素受體新亞型TRβΔ的DNA結(jié)合能力研究姓名：胡麗玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：張鏡宇20100501天津醫(yī)科大學(xué)碩十學(xué)位論文結(jié)合能力，同時(shí)檢測(cè)單獨(dú)的TRl3A、TRl31、RXRa蛋白分別與TREs(DR4)的結(jié)合情況。結(jié)果1成功構(gòu)建了pETDuet一1／rRXRa重組表達(dá)載體。2成功表達(dá)了RXRot融合蛋白：重組質(zhì)粒pETDuet1／rRXRa轉(zhuǎn)化菌、pETDuet1／TRI

2、ll轉(zhuǎn)化菌和pETDuet。1／取腳轉(zhuǎn)化菌誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物的SDSPAGE均在約55kD附近出現(xiàn)深染條帶(RXRa約50kD，TRl31約52kD，TRl3A約56kD)，目的蛋白大小與預(yù)期基本一致，且主要存在于包涵體中。RXRQ、TRl31、TRl3A的表達(dá)量分別達(dá)到2138mg／L、2510mg／L、1619mg／L培養(yǎng)基，三種重組蛋白占菌體總蛋白的百分比分別為322％、305％、288％。3包涵體形式的RXRa、TR[31、TRl3A

3、重組蛋白可溶解于高濃度的尿素溶液中，經(jīng)透析后占上清液的主要部分。4免疫共沉淀證實(shí)TRp△及TRpl均能夠與RXRa蛋白分別形成TRl3A／RXRa、TRl31／RXRa雜二聚體。5TRfll、TRl3A兩種蛋白與RXRa形成雜二聚體后均能夠結(jié)合TREs(DR4)，而且單獨(dú)的RXRa、TRl31、TRl3A蛋白也分別能夠結(jié)合TREs(DR4)。結(jié)論本文通過構(gòu)建pETDuet1／rRXRa重組表達(dá)載體成功表達(dá)了RXRa蛋白。結(jié)果證實(shí)甲狀腺激

4、素受體TRl3A同TRl31一樣，能與RXRGt形成雜二聚體結(jié)合DNA，而且TRp△、TRpl和RXRa三者均具有DNA結(jié)合活性。我們的研究結(jié)果與Williams報(bào)道有所不同，據(jù)Williams其文中報(bào)道單獨(dú)的TRl31、RXRa蛋白均不能夠結(jié)合TREs(DR4)，只有在TRl31和RXRa共同孵育形成TRl31／RXRa雜二聚體之后才能與TREs(DR4)結(jié)合。而本文顯示TRl3A、TRyl甚至RXRa本身單獨(dú)也能結(jié)合DR4，但它們是