28040.d1蛋白酶的克隆表達(dá)、純化、生物活性測(cè)定及抗體的制備_第1頁(yè)
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1、華中師范大學(xué)碩士學(xué)位論文D1蛋白酶的克隆表達(dá)、純化、生物活性測(cè)定及抗體的制備姓名：李慧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：祁超李偉國(guó)20100501⑨碩士學(xué)位論文MASTER’STHESISAbstractmcarboxyterminalprocessingproteaseofDIprotein(CtpA)，whichisencodedbytheCtpAgeneinchloroplasts，isresponsiblef

2、orprocessingofprecursorD1protein(pD1)、ⅣimashortC—terminalextensionCtpAclipsthepDlpeptideextensiontoformthematureDIprotein(mD1)，whichisusedintheassemblyofphotosystemIICOreSotheCtpAplaysanimportantroleinphotodamage—repairc

3、ycleinphotosystemII，andispredictedtobeanexcellenttargetforthediscoveryofageneralbroad—spectrumherbicideTheresearchaimofthisworkiStoconstructtheprokaryoticexpressionvectorofspinachCtpAandexpresstherecombinantproteinbygene

4、engineeringmethodWeamplifiedtheCtpAgenewithstandardPCRmethodfromspinacheDNAandconstructeditintopET23aandpET28avectorstogivetwecombinantexpressionplasmidsRecombinantpET23aCtpAandpET28aCtpAfusionproteinswithHistagwereexpre

5、ssedassolubleproteininEscherichiacoliBL21(DE3)afterinduction、耐tIlO2mmol／Lor01mmol／LIPTGat8“t2for7211Wepurifiedtherecombinantproteins、析tIltheNiNTAa伍nitychromatographyandverifiedtheproteinbySDSPAGEandWesternblottingwitllan

6、tihisantibodyHydrolysisactivityofpET28aCtpAWasassayedbyHPLCmethod、骯thasynthetic24一metoligopeptidecorrespondingtocarboxylterminalofprecursorD1protein，andgaveatotalactivityof110nmol／(nagmin)WeusedthepurifiedCtpAproteinasan

7、tigentoimmunerabbitandBalb／cmicefortheproductionofpolyelonalantibodyandmonoclonalantibodywiththetiterof1：100000byELISArespectivelyandgainedfourhybridomacellsTheresultsobtainedinthispaperprovidedthefeasibilityofhighthroug

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