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文檔簡介
1、浙江理工大學碩士學位論文家蠶BYB基因的表達及其功能分析姓名:楊光申請學位級別:碩士專業(yè):生物化學與分子生物學指導教師:盛清張耀洲20100301浙江理工大學碩十學位論文AbstractYboxproteinsareafamilyofhighlyconservednucleicacidbindingproteinswhichexistwidelyinvariousorganismsfrombacteriatohumanThehighle
2、velofconservationoftheseCSD(coldshockdomain)proteinssuggeststhatYboxproteinsplayessentialrolesinbiologicalprocessesThefullopenreadingframe(ORE)ofBombyxmoriYboxwasobtainedfromsilkwormpupabyRTPCRandnamedBombyxmoriYbox(BYB)
3、,ofwhichtheaccessionnumberWasAB0985371ThisORFcontained780bp,encodingapolypeptideof259aminoacidswiththepredictedmolecularweightof2867kDAfterclonedintopET28a()andexpressedinEcoliBL21(DE3),BYBwasfused淅tllHistagandpurifiedon
4、chelatingcolumnsThemolecularweightofthisfusionproteinWas32kD,characterizedbySDSPAGEafterbeingfurtherpurifiedThisresultprovedthatBYBwithHis—tagWasexpressedinthefightformThepurifiedfusionproteinWasusedtoimmunizeamaleNewZea
5、landrabbitThen,antiserumWasharvested,andIgGWaspreparedbyaffinitychromatographyusingimmobilizedproteinABYBinsometissuesofthefifthinstarlarvae,suchashead,Malpighiantubule,epidermis,silkglands,seminalglands,gutandfattybodyw
6、ereextractedandanalyzedbyWesternblottingTheresultshowedthatBYBexistedinlarva’Sseminalglands,Epidermis,andSOonAndthesimilarresultWasobtainedwhenimmunohistochemistryanalysiswasappliedtothefifthinstarlarvaandpupaWealsocompa
7、redthequantityofBYBmRNAindifferenttissuesofthefifthinstarlarvaanddifferentstagesofsilkwormgrowthTheseresultssuggestedthatBYBWasselectivelyexpressedinsilkworm’Sseminalglands,epidermisandMalpighiantubuleAftersubcellularloc
8、alizationwithBYB,wefoundthatitmainlyexistedincytoplasmundernormalconditionsHoweverafterBmNcellhadbeentreatedwithcoldshockof4℃for2h,mostBYBproteinsdistributedinthecytoplasmandthenucleusThisresearchlaidagoodfoundationoffur
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